本发明公开了一种对蛴螬高效致死的RNAi靶标基因及其应用,属于生物技术和农业应用领域。该RNAi的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示,其获得的步骤如下:(1)提取蛴螬的总RNA,反转录获得cDNA第一链;(2)以步骤(1)中获得的cDNA为模板,使用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物进行PCR扩增;(3)以步骤(2)中的PCR产物为模板,使用SEQ ID NO.3~6所示的引物进行PCR,获得合成dsRNA的正、反向模板;(4)反应完成后回收电泳产物,以回收的电泳产物为模板,转录合成dsRNA。注射或饲喂上述dsRNA72h后,蛴螬幼虫的HpCDA1沉默效率高于95%,死亡率高于90%。
本发明公开了一种蛴螬海藻糖酶基因dsRNA及其应用,属于生物技术和农业应用领域。该dsRNA如SEQ ID NO.13所示,其制备过程如下:(1)提取蛴螬的总RNA,反转录获得cDNA第一链;(2)以步骤(1)中获得的cDNA为模板,使用SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物进行PCR扩增;(3)以步骤(2)中的PCR产物为模板,使用SEQ ID NO.3~6所示的引物分别进行PCR,获得合成dsRNA的正、反向模板;(4)反应完成后回收电泳产物,以电泳产物为模板,转录合成dsRNA。蛴螬注射上述dsRNA后,该基因沉默效率高达92.4%,幼虫死亡率达98.6%。