本发明涉及生物技术领域，公开了一种靶向端粒DNA重复序列的sgRNA组合物及其用途，其中所述sgRNA包括sgRNA1和/或sgRNA2，所述sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，采用本发明的sgRNA结合CRISPR/Cas9基因编辑系统能够实现对细胞端粒DNA重复序列的高效切割，使细胞端粒长度降至5000kb以下，可广泛应用于端粒缩短细胞模型的构建。
本发明公开了一种靶向人DMD位点的sgRNA及其应用，属于基因编辑和细胞工程技术领域。本发明的sgRNA的靶向位点位于人DMD基因的第50号外显子区域；所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用单碱基编辑系统中的ABE和CBE系统对HEK293T细胞中的DMD基因进行基因编辑，操作简单，编辑效率高。
本发明提供了一种sgRNA及其构建的CREBRF点突变型巴马香猪和应用，所述sgRNA包括如SEQ ID NO:1或如SEQ ID NO:2所示的核酸序列。本发明采用CRISPR/Cas9和同源重组相结合的方案，进行CREBRF基因的点突变，设计的gRNA对CREBRF基因第1370位点附近的靶位点具有特异结合性，可以引导CRISPR/Cas9在靶位点附近进行特异性识别切割，形成双链DNA断裂促进以外源单链DNA为模板的同源重组修复，从而引入点突变；由此制备的突变型巴马香猪具有典型的肥胖表型，可以作为模式生物应用于肥胖和糖尿病治疗药物研发领域。
本发明涉及促进人多能干细胞异种嵌合的方法。该方法包括改变所述细胞中预定蛋白质的表达水平，所述预定蛋白质具有下列氨基酸序列的至少之一：(a)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；(b)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；(c)SEQ ID NO：1或2所示的氨基酸序列的一部分；(d)与(a)、(b)和(c)中所示氨基酸序列具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，进一步优选至少99％序列同一性的氨基酸序列。本发明的方法可以促进人多能干细胞，包括人诱导多能干细胞(hiPSCs)进行异种嵌合，进入到鼠、兔和猪等异种动物体内，为在异种动物中获得人源性细胞、组织或器官奠定基础。
