本发明属于基因工程疫苗技术领域,特别涉及一种非洲猪瘟病毒串联基因、共表达载体、构建方法及应用,所述重组载体是由人工合成的多基因克隆表达元件连入pIRES2‑egfp载体中的BglII和BamHI酶切位点之间,并且在pIRES2‑egfp载体1986nt的XbaI位点之后插入oriR101获得,所述基因克隆表达元件的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,将所述重组载体转化进大肠杆菌感受态细胞中,筛选并扩大培养后收集纯化多基因蛋白,得抗非洲猪瘟病疫的亚单位疫苗,将所述重组载体转化进乳酸杆菌感受态细胞中,筛选并扩大培养后可得乳酸杆菌菌苗。制备的疫苗在不同水平、不同层次刺激机体产生抗体,激发机体产生强力有效的特异性免疫应答,发挥高效的免疫保护力,进行抗非洲猪瘟病毒的免疫应答。