本发明涉及一种肝素骨架合酶及其突变体与应用。本发明中的肝素骨架合酶来源于动物奈瑟菌，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，重组表达水平是现有大肠杆菌K5肝素骨架合酶KfiA重组表达水平的6.8倍，每升发酵液的总酶活是肝素骨架合酶KfiA的5.22倍。对上述肝素骨架合酶氨基酸序列的第16位、25位、30位、111位、165位、172位进行定点突变，所得肝素骨架合酶突变体均具有较高的表达水平。本发明中的肝素骨架合酶及其突变体提高了肝素骨架合成中GlcNAc转移合成效率，极大地促进了肝素仿生合成应用化发展，为糖胺聚糖的研究发展开启了全新的一页。
本发明涉及一种巴氏杆菌肝素骨架合酶BtHS1及其突变体与应用。本发明中的肝素骨架合酶BtHS1来源于巴氏杆菌，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，同时具备乙酰氨基葡萄糖转移酶GlcNAc‑T和葡萄糖醛酸转移酶GlcA‑T两种转移酶活性。对上述巴氏杆菌肝素骨架合酶氨基酸序列的第305位进行定点突变，得到了活性更高的BtHS1突变体。本发明中的巴氏杆菌肝素骨架合酶及其突变体提高了肝素骨架合成中GlcNAc和GlcA转移合成效率，极大地促进了肝素仿生合成应用化发展，为糖胺聚糖的研究发展开启了全新的一页。
本发明涉及一种肝素骨架合酶及其编码基因与应用。本发明中的肝素骨架合酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，来源于卡氏杆菌，是一种催化糖基转移的功能酶。本发明中的肝素骨架合酶突变体，是将上述肝素骨架合酶的氨基酸序列中第56位的天冬酰胺突变为天冬氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中的肝素骨架合酶是一种全新来源的肝素骨架合酶，具备乙酰氨基葡萄糖的转移酶活性，并且可以利用底物GlcA‑pNP和UDP‑GlcNA有效的合成肝素二糖骨架，为进一步合成肝素糖链奠定了基础。
本发明涉及一种硫酸软骨素合酶及其编码基因与应用。本发明中的硫酸软骨素合酶来源于尿放线杆菌(Actinobacillus Ureae)，所述硫酸软骨素合酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该硫酸软骨素合酶同时具备乙酰半乳糖胺转移酶GalNAc‑T和葡萄糖醛酸转移酶GlcA‑T两种转移酶活性，除了其天然底物UDP‑GalNAc外，还可以利用独特的糖基供体UDP‑GalNAz转移至非还原端为GlcA的硫酸软骨素糖链上，从而合成糖链结构中带有叠氮基团的非天然的硫酸软骨素寡糖。
本发明涉及突变获得的一种腺苷三磷酸/双磷酸酶及其编码基因与应用。腺苷三磷酸/双磷酸酶的编码基因YND1‑502F‑518H/GSGSGS‑gene，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。腺苷三磷酸/双磷酸酶YND1‑502F‑518H/GSGSGS，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次通过将Genebank中GeneID856722的突变体第1504‑1554位的疏水性跨膜区进行替换的方法，在大肠杆菌表达系统可溶性表达了YND1‑502F‑518H/GSGSGS。
