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[发明专利]一种体外快速扩增干细胞样记忆性宫颈癌肿瘤浸润淋巴细胞的方法-CN202211627868.5在审
发明人：梁少帅;曹启龙;韩国英;张松梅;王芝辉;徐娟;董友玉;张文茜 -专利权人：青岛海尔生物科技有限公司
申请日： 2022-12-16 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种体外快速扩增干细胞样记忆性宫颈癌肿瘤浸润淋巴细胞的方法，属于生物医药技术领域，主要是将提取的肿瘤淋巴细胞TILs在第一溶液中培养，收集细胞，将收集的细胞与饲养层细胞在第二溶液中进行培养，收获干细胞样记忆性宫颈癌TILs，所述饲养层细胞是由基因工程化Hela细胞处理获得，所述基因工程化Hela细胞株为表达跨膜的细胞因子IL‑7、IL‑15，IL‑21的细胞株，本发明提供的TILs扩增方法，培养周期短、杀伤力强，具有很高的临床应用价值。
一种体外快速扩增干细胞记忆宫颈癌肿瘤浸润淋巴细胞方法

[发明专利]一种靶向HPV16 E7的HLA-A*0201限制性CD8毒性T细胞的制备方法-CN202310088779.6在审
发明人： 王芝辉;韩国英;梁少帅;曹启龙;黄伟;况斐;朱钰婷;董友玉;徐娟;张文茜 -专利权人：青岛海尔生物科技有限公司
申请日： 2023-02-01 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种靶向HPV16E7的HLA‑A*0201限制性CD8毒性T细胞的制备方法，属于生物医药技术领域，主要是分离HLA‑A*0201阳性健康供者PBMC，取部分PBMC进行HPV16E7aa11～20刺激，并与剩余PBMC混培，再采用偶联负载HPV16E7aa11～20的HLA‑A2:Ig的磁珠进行筛选，将分选出的细胞经CD3/CD28抗体激活并大量扩增后，收获大量靶向HPV16E7抗原的HLA‑A*0201限制性CD8毒性T细胞，能与HLA‑A2/HPV16E7aa11～20Tetramer结合CD8+阳性T细胞占比大于90％，活率大于99％。
一种靶向 hpv16 e7 hla 0201 限制性 cd8 毒性细胞制备方法

[发明专利]一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法-CN202211494461.X在审
发明人： 王芝辉;徐娟;曹启龙;梁少帅;董友玉;张文茜 -专利权人：青岛海尔生物科技有限公司
申请日： 2022-11-25 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法，属于生物免疫学技术领域，具体为一种磁珠偶联因子复合物，包括磁珠、4‑1BBL，IL21，MICA；磁珠偶联因子复合物在制备NK细胞中的应用及扩增NK细胞的方法；本发明提供的磁珠偶联因子复合物，能够富集在细胞团周围，持续作用，对NK细胞的激活和扩增作用更优，本发明制备的NK细胞扩增倍数、NK阳性率，作用效果更优。
一种磁珠偶联因子复合物扩增 nk 细胞方法

[发明专利]一种间充质干细胞无支架三维凝胶的制备方法及应用-CN201911135106.1在审
发明人： 王芝辉;张剑慧;马贺然;张慧慧;谭毅;韩镇 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司
申请日： 2019-11-19 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种脂肪干细胞无支架三维凝胶培养体系的培养方法，包含如下步骤：将脂肪间充质干细胞接种于培养皿中，在含抗坏血酸‑2‑磷酸盐（ASC2P）凝胶诱导培养基中进行诱导培养，脂肪间充质干细胞在诱导培养基的作用下分泌胶原，完成细胞间的相互胶连，形成具有一定立体结构的水凝胶状态的脂肪间充质干细胞无支架三维凝胶。该方法采用自体脂肪作为干细胞的来源，且不添加外来组织构架脂肪干细胞无支架三维凝胶，呈水凝胶状态，能够适应不同形状的软骨损伤，无排异反应，更有利于软骨的再生修复。
脂肪间充质干细胞三维凝胶无支架水凝胶状态诱导培养基脂肪干细胞培养皿抗坏血酸立体结构培养体系软骨损伤外来组织诱导培养自体脂肪磷酸盐干细胞软骨胶连胶原凝胶分泌构架接种修复细胞再生

[发明专利]获得具有溃疡性结肠炎治疗作用的细胞亚群的培养方法-CN201810357257.0在审
发明人： 王芝辉;王义国;谭毅;马瑞萍 -专利权人：山东智康医疗科技有限公司
申请日： 2018-04-20 - 公布日： 2018-09-14 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得具有溃疡性结肠炎治疗作用的细胞亚群(CD90+CD105+)的培养方法，以自体骨髓为处理对象，包括以下步骤：(1)从成人骨髓中分离出单个核细胞，进行培养、扩增；(2)将培养的单个核细胞进行细胞因子活化刺激；(3)根据细胞生长情况，进行扩增传代操作，20天后进行流式检测细胞表型。本发明取骨髓进行单个核细胞分离，采用独特的无血清培养基、自体血清添加物和细胞因子组合下进行干细胞的培养，记录干细胞的增殖能力、检测细胞的亚群含量。本发明能够解决未经培养的干细胞中MSC比例低、增殖能力低的限制、扩增受限等问题。获得具有高比例高效治疗溃疡性结肠炎能力的细胞亚群(CD90+CD105+)。
溃疡性结肠炎单个核细胞细胞亚群干细胞扩增增殖能力治疗传代无血清培养基细胞因子活化添加物成人骨髓处理对象细胞表型细胞生长细胞因子自体骨髓自体血清检测流式受限亚群骨髓细胞刺激记录

[发明专利]一种脐血淋巴细胞DC-CIK的培养方法-CN201510999660.X在审
发明人：张慧慧;王芝辉;武建明;张剑慧;谭毅 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司
申请日： 2015-12-29 - 公布日： 2016-09-28 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于免疫细胞体外培养技术领域，特别公开了一种脐血淋巴细胞DC‑CIK的培养方法。本发明以脐血为处理对象，经过脐血单个核细胞的分离、DC细胞的分离培养、CIK细胞的诱导培养、DC和CIK的共培养制备DO‑DIK细胞，并添加CTLA‑4mAb和PD‑1mAb，最后离心收集成熟的DC‑DIK细胞，得到产品。本发明通过用CD3mAb包被培养瓶，培养前期连续刺激，减少了细胞因子的使用，提高效应细胞群活化效率和扩增效率，同时降低了培养成本。
一种淋巴细胞 dc cik 培养方法

[实用新型]一种人外周血单个核细胞分离辅助装置-CN201620005183.0有效
发明人：谭毅;张慧慧;张剑慧;王芝辉;武建明 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司
申请日： 2016-01-06 - 公布日： 2016-07-06 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种实验辅助装置，具体涉及一种用于人外周血单个核细胞分离的辅助装置。该一种人外周血单个核细胞分离辅助装置，其特征是：本装置为圆形塑料盖板，塑料盖板上均匀分布有细胞分离孔。其有益效果是：可用于细胞治疗和临床检验和科研试验领域,用于分离淋巴细胞、红细胞等分离试验，可大大降低实验难度，缩短操作时间, 能使实验更加方便，快捷，高效；塑料盖板材质为细胞培养常用塑料材质，对细胞无毒害作用，安全可靠。
一种人外周血单个细胞分离辅助装置

[实用新型]一种便携式免疫细胞运输低温恒定装置-CN201620005185.X有效
发明人：武建明;张剑慧;张慧慧;谭毅;王芝辉 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司
申请日： 2016-01-06 - 公布日： 2016-06-01 - 主分类号： B65D81/18 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种医疗用品，特别公开了一种便携式免疫细胞运输低温恒定装置。该一种便携式免疫细胞运输低温恒定装置，箱体内设有内胆，内胆两侧设有4℃温度缓冲区域，4℃温度缓冲区域一侧设有-20℃冰源区域，4℃温度缓冲区域与-20℃冰源区域通过不锈钢钢板分格，箱体内底端设有低温恒温板，4℃温度缓冲区域与-20℃冰源区域内还设有4℃冰盒与-20℃冰盒；所述箱体上端设有箱体盖板，箱体盖板内侧设有温度传感器探头，温度传感器探头一侧设有温度显示器；所述箱体内设有保温层。其有益效果是：结构简单，使用方便，制作成本低廉，有效的防止细胞聚团，防止细胞活力下降，便于观察内胆实时温度，给免疫细胞的中短途运输带来保障。
一种便携式免疫细胞运输低温恒定装置

[发明专利]一种经腺病毒基因修饰的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养方法-CN201510999658.2在审
发明人：张剑慧;王芝辉;武建明;谭毅;张慧慧 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司
申请日： 2015-12-29 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种淋巴细胞的培养方法，特别公开了一种经腺病毒基因修饰的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养方法。本发明取150-200mL脐血或自体外周血进行单个核细胞分离，贴壁2h分离培养DC细胞，未贴壁细胞于含IL-2的培养基中进行T淋巴细胞预养。DC细胞经iAPA因子腺病毒感染诱导成熟后，收集成熟DC，按照DC∶T为1∶10的效靶比刺激自体原初T淋巴细胞，使其分化为细胞毒性T淋巴细胞，观察记录CTL的增殖能力、检测CTL的细胞毒性。本发明能够解决血液成分单采机的限制，采集的血量少，减轻患者的负担，并且能够在体外观察iAPA-DC刺激原初T细胞分化为肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞。
一种病毒基因修饰肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞培养方法

[发明专利]一种自体外周血淋巴细胞的培养方法-CN201210335471.9有效
发明人： 王芝辉;梁晨;孔飞 -专利权人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司;王芝辉;梁晨;孔飞
申请日： 2012-09-12 - 公布日： 2012-12-12 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）从外周血中分离PBMC，然后，重悬于无血清培养基中，静置培养，制得初培养液；（2）向初培养液中补加无血清培养基，同时添加IL-2，静置培养，得二次培养液；（3）向二次培养液中补加无血清培养基，同时添加IL-2，静置培养，得培养液；（4）将培养液均匀分成2份，然后用无血清培养基补足体积并添加IL-2，静置培养，重复本步骤，制得自体外周血淋巴细胞；本发明通过向无血清培养基中添加多种单抗及细胞因子，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。经检测，活化及扩增效率较现有方法明显提高，激活3天左右有大量细胞团出现。
一种体外淋巴细胞培养方法

[实用新型]一种骨科用可调式夹板-CN201120443133.8有效
发明人： 王芝辉 -专利权人： 王芝辉
申请日： 2011-11-10 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： A61F5/058 文献下载
摘要：一种骨科用可调式夹板，它涉及一种骨科用夹板，具体涉及一种骨科用可调式夹板。本实用新型为了解决现有骨科用夹板宽窄和长短均不能自由调节，导致夹板长度和宽度不适合患者需固定部位尺寸的需要，从而影响患者术后骨折部位恢复的问题。本实用新型包括两个固定槽板、合页、四个竖直方向伸缩插板和两个水平方向伸缩插板，两个固定槽板相对设置，每个固定槽板上端端面上和下端端面上分别开有竖向插槽，每个竖向插槽内插装一个竖直方向伸缩插板，两个固定槽板相对的一侧面中部开有水平插槽，合页设置在两个固定槽板之间，每个水平方向伸缩插板的另一端对应插装在一个水平插槽内。本实用新型用于固定患者骨折部位。
一种骨科调式夹板

[实用新型]一种骨科用可调整式三角支架-CN201120427365.4有效
发明人： 王芝辉 -专利权人： 王芝辉
申请日： 2011-11-02 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： A61G13/12 文献下载
摘要：一种骨科用可调整式三角支架，它涉及一种骨科用三角支架，具体涉及一种骨科用可调整式三角支架。本实用新型为了解决目前县、乡级中小医院进行闭合复位髓内钉固定手术难度大，操作不便、费时费力，且达不到预期效果的问题。本实用新型包括直角定形板、第一45度角定形板、第二45度角定形板、长直角边连接板、短直角边连接板、斜边连接板和若干个调节螺栓，长直角边连接板的一端与直角定形板的水平定形板上的第一长孔通过调节螺栓固定连接，长直角边连接板的另一端与第一45度角定形板的第一短板上的第二长孔通过调节螺栓固定连接。本实用新型用于辅助进行闭合复位髓内钉固定手术骨折治疗。
一种骨科可调整式三角支架

[发明专利]一种利用自裂解蛋白lntein纯化重组目标蛋白的方法和试剂盒-CN200880128674.2无效
发明人：陈国强;王芝辉 -专利权人：汕头大学
申请日： 2008-05-23 - 公布日： 2011-04-06 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用自裂解蛋白Intein纯化重组目标蛋白的方法，包括：在宿主细胞中重组表达融合蛋白，所述融合蛋白包括目标蛋白结构域、自裂解Intein以及一个或多个疏水颗粒结合结构域，其中所述自裂解Intein位于所述目标蛋白结构域和所述一个或多个疏水颗粒结合结构域之间；使所述融合蛋白从宿主细胞中释放出来，加入疏水颗粒并进行孵育；收集孵育后的疏水颗粒并加入裂解液，使所述融合蛋白中的自裂解Intein发生断裂；分离除去所述疏水颗粒，从而获得含有基本上纯化的所述目标蛋白的溶液。本发明还提供了用于进行上述方法的试剂盒。
一种利用裂解蛋白 lntein 纯化重组目标方法试剂盒

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