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[发明专利]一种SARS-COV-2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法-CN202111363444.8有效
发明人：周孟云;毛水花;孙慧敏;陈瑞婷;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2021-11-17 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种SARS‑COV‑2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法，属于生物制品技术领域。本发明以NDV LaSota病毒株为骨架载体，S2P蛋白基因插入到NDV病毒载体P基因和M基因之间，deltaRBD‑Fc融合蛋白基因插入M基因和F基因之间，利用病毒反向遗传学技术拯救获得具有限制感染性NDV毒株用于疫苗株生产。相对于目前单个新冠S抗原或RBD抗原疫苗，本发明引入原始株S蛋白突变体S2P的编码序列和含Delta变异株S蛋白受体结合域RBD的融合蛋白编码序列共同作为抗原形成二价疫苗株，动物试验结果显示无论是经鼻腔接种亦或肌肉注射免疫途径，该疫苗株都能达到优异的免疫效果。
一种 sars cov 二价重组新城疫病载体相应疫苗制备方法

[发明专利]一种水泡性口炎病毒的致弱方法及致弱病毒株和应用-CN202211511531.8在审
发明人：孙慧敏;方晨捷;毛水花;时丹怡;简书令;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-11-29 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种水泡性口炎病毒的致弱方法及致弱病毒株和应用，包括：对水泡性口炎病毒编码M蛋白的氨基酸序列进行不同数量和不同位置的氨基酸缺失，利用反向遗传操作系统获得具有相应缺失的水泡性口炎致弱病毒。本发明以M基因缺失的方式降低了水泡性口炎病毒的毒力，为VSV成为更加安全的新兴病毒性疾病的疫苗载体和溶瘤病毒载体奠定基础。
一种水泡口炎病毒方法应用

[发明专利]新城疫疫苗株及其构建方法、禽类免疫识别方法、应用-CN202210653186.5有效
发明人：孙敏华;宋家升;周洁;任涛;廖明;孙慧敏;董嘉文;韩翡;涂玉蓉;李林林;张俊勤;黄允真 -专利权人：广东省农业科学院动物卫生研究所;浙江迪福润丝生物科技有限公司;华南农业大学;广东永顺生物制药股份有限公司
申请日： 2022-06-09 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种新城疫疫苗株，分类名为新城疫病毒(Newcastle disease virus)，保藏编号为：CCTCC No：V202235；保藏日期：2022年5月7日，保藏单位：武汉大学中国典型培养物保藏中心。该疫苗株突变缺失了HN蛋白的关键中和位点，通过病毒拯救获得了重组病毒rLa‑mGM。将重组病毒和LaSota疫苗免疫SPF鸡后，通过测定HI抗体能够确定是否免疫成功，通过间接ELISA方法能够实现野毒和疫苗毒的鉴别。同时，本发明还提供了该疫苗株的构建方法、禽类免疫识别方法、应用。
新城疫苗及其构建方法禽类免疫识别应用

[发明专利]一种融合蛋白HN-RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用-CN202211397087.1在审
发明人：陈瑞婷;毛水花;周孟云;方晨捷;简书令;时丹怡;孙慧敏;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-11-09 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种融合蛋白HN‑RBD、编码基因、重组NDV病毒载体、重组NDV病毒及其应用；所述融合蛋白HN‑RBD包含新城疫病毒HN蛋白的部分结构域和新冠病毒S蛋白的RBD；所述新城疫病毒HN蛋白的部分结构域包括新城疫病毒HN蛋白的胞内结构域和跨膜结构域。当本发明的融合蛋白HN‑RBD的编码序列与新冠病毒S蛋白或新冠病毒S蛋白变体的编码序列组合共同插入NDV病毒载体中时，可以使得重组NDV病毒粒子表面展示更多的新冠病毒抗原S蛋白，同时提高重组NDV病毒产生黏膜免疫抗体IgA的能力，对开发优秀的重组NDV病毒疫苗候选株具有重大意义。
一种融合蛋白 hn rbd 编码基因重组 ndv 病毒载体及其应用

[发明专利]一组A型流感病毒致弱毒株及其制备方法和应用-CN202210111926.2在审
发明人：张毅兰;孙慧敏;毛水花;周孟云;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明涉及一组A型流感病毒致弱毒株及其制备方法和应用，属于病毒致弱技术领域。本发明提供了一组A型流感病毒致弱毒株，所述致弱毒株通过对M2基因进行修饰获得，所述修饰包括进行终止密码子突变和在突变的终止密码子后进行缺失突变。本发明所述致弱毒株稳定性更强，多次传代不会发生回复突变，安全性更高，对细胞系的依赖不强，在疫苗生产过程中具有较强的优势。
一组流感病毒致弱毒株及其制备方法应用

[发明专利]一种区分感染和免疫的致弱流感病毒疫苗株及疫苗-CN202210100633.4在审
发明人：孙慧敏;毛水花;余飞;简书令;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种区分感染和免疫的致弱流感病毒疫苗株及疫苗，属于生物制品技术领域。流感病毒致弱毒株在含A/B嵌合型NA基因的流感病毒株的基础上对M基因进行突变获得；所述突变包括在CCTCTC序列的3'端后缺失一段长度8bp以上的DNA片段。流感病毒致弱毒株在MDCK‑M2细胞中可以生长，但不能在缺乏M2的MDCK细胞中生长，具有良好减毒效果，克服生产高致病性禽流感灭活疫苗需要培养非复制缺陷病毒带来生物安全风险；制备的灭活疫苗免疫SPF鸡后，免疫鸡血清检测到了较高水平的HAI效价，显示致弱流感病毒株所产生的毒株在制备禽类动物禽流感灭活疫苗中安全和有效，免疫产生的抗血清具有区分自然感染和免疫的能力。
一种区分感染免疫流感病毒疫苗

[发明专利]一种基于M基因核苷酸片段删除的流感病毒的致弱方法以及致弱流感病毒株和应用-CN202210100385.3在审
发明人：陈瑞婷;毛水花;孙慧敏;周孟云;李晓雨;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种流感病毒的致弱方法以及致弱流感病毒株和应用，属于减毒疫苗技术领域。本发明所述致弱方法，包括以下步骤：删除流感病毒M2部分基因序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。本发明致弱方法所产生的致弱病毒株具有良好生长特性和生产安全性，可以在鸡胚中快速生长繁殖，给生产致弱病毒疫苗候选株带来巨大便捷；同时，致弱毒株具有限制性复制能力，并非单次感染细胞，能够产生高水平病毒HAI效价，免疫小鼠攻毒后状态良好，10天内体重恢复健康水平，为开发流感减毒疫苗奠定基础。
一种基于基因核苷酸片段删除流感病毒方法以及应用

[发明专利]一种流感病毒的致弱方法及流感致弱病毒株和应用-CN202210100598.6在审
发明人：孙慧敏;余飞;周孟云;毛水花;方晨捷;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种流感病毒的致弱方法及流感致弱病毒株和应用，属于生物医药技术领域。本发明所述致弱方法包括：对流感病毒保守区M2蛋白跨膜结构域和细胞质结构域进行随机数量和位置的碱基缺失，获得具有相应碱基缺失的流感致弱病毒。本发明所述致弱方法获得的流感致弱病毒株在表达M2蛋白的MDCK细胞系上具有良好的生长特性；较高剂量的病毒株可以在MDCK细胞或鸡胚中生长且具有较高的鸡红细胞凝集价；而且滴鼻免疫Balb/C小鼠，发现相对于亲本病毒IAV PR8，病毒株对小鼠是非致病性的。本发明随机碱基缺失的方式降低了流感病毒的毒力，为更加安全、有效的IAV减毒活疫苗的筛选奠定基础。
一种流感病毒方法流感病毒应用

[发明专利]一组基于同义突变和/或缺失突变的A型流感病毒致弱毒株及其制备方法和应用-CN202210100630.0在审
发明人：余飞;孙慧敏;毛水花;时丹怡;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明涉及一组基于同义突变和/或缺失突变的A型流感病毒致弱毒株及其制备方法和应用。本发明所述致弱毒株通过对M2基因进行修饰获得；所述修饰包括对A型流感病毒M基因中M2基因和M1基因重叠的部分进行同义突变，保证M1氨基酸序列的完整和不变；或，所述修饰包括在对A型流感病毒M基因中M2基因和M1基因重叠的部分进行同义突变，保证M1氨基酸序列的完整和不变的同时，在M2基因删除部分核苷酸序列。本发明所述致弱毒株稳定性强，多次传代不会发生回复突变，安全性高，对细胞系的依赖不强，在疫苗生产过程中具有较强的优势。
一组基于同义突变缺失流感病毒致弱毒株及其制备方法应用

[发明专利]一种同义突变结合删除突变的流感病毒的致弱方法及致弱流感病毒株和应用-CN202210100642.3在审
发明人：毛水花;周孟云;陈瑞婷;刘晓菲;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种同义突变结合删除突变的流感病毒的致弱方法及致弱流感病毒株和应用，属于致弱病毒疫苗技术领域。本发明所述致弱方法包括以下步骤：对A型流感病毒M基因中M2基因和M1基因重叠的部分进行同义突变，保证M1氨基酸序列的完整和不变，同时，在M2基因跨膜区进行终止密码子突变和删除部分核苷酸序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。本发明所述致弱方法获得的病毒增殖过程稳定，没有回复野生型的可能性；高剂量接毒时可以在MDCK细胞中生长繁殖，具有限制性复制能力；安全性佳，免疫效果好，可以作为减毒活疫苗候选株。
一种同义突变结合删除流感病毒方法应用

[发明专利]一种展示新冠S蛋白的融合蛋白和重组病毒粒子及其应用-CN202111541851.3在审
发明人：陈瑞婷;孙慧敏;毛水花;周孟云;宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2021-12-16 - 公布日： 2022-03-22 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种展示新冠S蛋白的融合蛋白和重组病毒粒子及其应用，本发明属于生物制品技术领域。本发明提供了一种表达新冠S蛋白的融合基因及融合蛋白，该融合基因或融合蛋白包含新冠S蛋白的胞外结构域序列与禽副黏病毒科F蛋白的跨膜结构域和胞内结构域序列。同时，含有该序列的重组NDV病毒具有较强的中和抗体的能力。可见，S蛋白的胞外域编码序列和APMV病毒科病毒(除NDV外)F蛋白的跨膜结构域和胞内结构域编码序列相融合所产生的融合基因或蛋白，具有成为优秀新冠疫苗候选抗原的巨大潜力。
一种展示蛋白融合重组病毒粒子及其应用

[发明专利]一种包含新型冠状病毒双抗原靶标序列组合的重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和疫苗-CN202111362383.3在审
发明人：宋家升;陈瑞婷;孙慧敏;毛水花;周孟云 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2021-11-17 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明提供了一种包含新型冠状病毒双抗原靶标序列组合的重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和疫苗，涉及生物医药技术领域。本发明利用NDV载体，新型冠状病毒S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原序列，将S蛋白基因和RBD基因共同插入NDV基因组内，利用病毒反向遗传学技术，拯救获得具有限制感染性NDV病毒载体疫苗株。该疫苗株可以被呼吸道细胞识别，产生粘膜免疫，并感染细胞，引起特异性免疫抗体水平升高。本发明双抗原靶标的引入，增强了疫苗株免疫原性的发挥，同时降低了疫苗株毒副作用的产生，免疫效果相对于单靶标抗原更具优势。
一种包含新型冠状病毒抗原靶标序列组合重组新城疫病载体相应疫苗

[发明专利]一种重组新城疫病毒载体新型冠状病毒疫苗候选株及其构建方法和应用-CN202010542477.8在审
发明人：宋家升;余飞;毛水花;周孟云 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2020-06-15 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组新城疫病毒载体新型冠状病毒疫苗候选株及其构建方法和应用，属于基因工程疫苗技术领域。本发明所述疫苗候选株以新城疫病毒LaSota株为载体，所述新城疫病毒LaSota株的P基因和M基因之间插入突变(C3756T，去除BamHI位点)的新型冠状病毒S基因；所述突变的新型冠状病毒S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供了安全有效，生产成本低而且可以通过鼻腔接种，刺激机体产生粘膜免疫的重组新城疫病毒载体新型冠状病毒疫苗候选株，具有重要的应用价值和突出的公共卫生安全意义。
一种重组新城疫病载体新型冠状病毒疫苗候选及其构建方法应用

[发明专利]一种制备区分免疫和感染动物H9亚型禽流感疫苗株的方法及应用-CN201711166717.3有效
发明人：宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2017-11-21 - 公布日： 2020-09-08 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种区分免疫和感染动物的H9亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用。本发明首次用B型流感病毒的NA基因作为标签，研制出一种制备区分免疫和感染的H9新型禽流感疫苗的方法。常规的H9亚型禽流感全病毒灭活疫苗效果确实，但在血清学上无法区分免疫和感染产生的抗体，给禽流感的监测和净化带来巨大障碍。本发明成功构建的区分免疫和感染H9亚型禽流感疫苗株中，NA基因和HA基因具用很好的兼容性，表现出很好的复制和生长等生物学特性，不需要在体外的传代适应，避免了传代适应引起的抗原变异的缺点。即使续传3代，仍然保持对鸡胚低致病力和高滴度生长的特性。本发明对H9亚型禽流感的防控和净化具有重要的意义和应用价值。
一种制备区分免疫感染动物 h9 禽流感疫苗方法应用

[发明专利]区分免疫和感染动物H7亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用-CN201711168682.7有效
发明人：宋家升 -专利权人： 浙江迪福润丝生物科技有限公司
申请日： 2017-11-21 - 公布日： 2020-08-28 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了区分免疫和感染动物H7亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用，高致病H7禽流感不仅给畜牧业带来巨大经济损失，而且严重威胁公共卫生学的安全。虽然常规的H7亚型禽流感全病毒灭活疫苗效果确实，价格低廉，应用面广等优点，但在血清学上无法区分免疫和感染动物，给禽流感的监测和净化带来巨大障碍。本发明用首次B型流感的NA作为标签，成功建立一种构建区分免疫和感染H7亚型禽流感疫苗株的方法。该发明对H7亚型禽流感的防控和净化具有重要的应用价值和公共卫生学意义。
区分免疫感染动物 h7 禽流感疫苗及其制备方法应用

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