本发明公开了一种酶催化胞嘧啶生产胞苷的方法及应用，属于酶工程和生物催化领域。本发明通过采用重组表达技术对α‑D‑核糖基转移酶进行过量表达，获得过量的α‑D‑核糖基转移酶；将表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α‑D‑核糖基转移酶的重组菌，或氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α‑D‑核糖基转移酶，添加至含有胞嘧啶、α‑D‑核糖‑1‑磷酸盐的反应体系中，对底物胞嘧啶进行催化，可以高效生产胞苷，促进了其在医药等领域中的应用。这种高效α‑D‑核糖基转移酶可用于实现胞苷的工业化生产，利于降低其生产成本及环境污染，实现绿色生物制造。
本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变，经筛选获得复合突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍，突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91％，具有工业化生产前景。
