本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人肠癌细胞PPP1R1C基因及其特异性sgRNA序列。首先是获得特异性靶向PPP1R1C基因功能区的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建PPP1R1C基因的sgRNA到慢病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞,获得PPP1R1C蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、对PPP1R1C基因切割效率高;且所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高并能特异性敲除PPP1R1C基因,得到敲除PPP1R1C基因的人肠癌细胞,从而为进一步研究肠癌细胞中PPP1R1C的作用机制提供强有力的工具。
本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人肠癌细胞CNR1基因及其特异性sgRNA序列。首先是获得特异性靶向CNR1基因第二外显子的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建CNR1基因的sgRNA到慢病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞,获得CNR1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对CNR1基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除CNR1基因,得到敲除CNR1基因的人肠癌细胞,从而为进一步研究肠癌细胞中CNR1的作用机制提供强有力的工具。