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[发明专利]一种培养基及其在胎猴神经干细胞分离培养中的应用-CN202310040346.3有效
发明人：何大健;郭祥玉;李晓江;李世华;杨伟莉;殷鹏;潘明天 -专利权人：暨南大学
申请日： 2023-01-11 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种培养基及其在胎猴神经干细胞分离培养中的应用，所述培养基的基底培养基是DMEM/F12，此外还含有1％L‑谷氨酰胺、2％B27无血清添加剂、5‑20ng/mL bFGF、5‑20ng/ml EGF、5‑10μg/mL肝素、0.2mM NEAA、1.5μg/mL CHIR99021、10ng/mL hLIF、0.1mM维C、抗生素适量。本发明培养基中，hLIF可抑制胚胎干细胞分化，促进细胞自我更新，可用于培养胎猴神经干细胞；同时CHIR99021是GSK3抑制剂，起到WNT激活剂的作用。与hLIF结合使用可从人类ES细胞中生成原始神经干细胞并维持神经干细胞自我更新能力和神经原性。
一种培养基及其神经干细胞分离培养中的应用

[发明专利]抗内源性PINK1蛋白的单克隆抗体及其应用-CN202310026939.4在审
发明人： 杨伟莉;李晓江;陈秀生;李世华;殷鹏;何大健;熊鑫;王琦;韩瑞;王志富 -专利权人：暨南大学
申请日： 2023-01-09 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C07K16/40 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗内源性PINK1蛋白的单克隆抗体及其应用，所述的单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示；其轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4～5和LVS所示。所述的单克隆抗体可用于对PINK1蛋白的识别和检测，用于非临床诊断目的；也可用于制备识别和检测PINK1蛋白的试剂和试剂盒。本发明通过人工构建PINK1基因序列片段，将其导入大肠杆菌中进行原核表达，收取、纯化PINK1多肽片段，并用其免疫小鼠，制备单克隆抗体，最终筛选得到能与PINK1蛋白特异性结合的杂交瘤细胞株2E7B6。所述抗体能与人和食蟹猴的PINK1蛋白特异性结合，表现出较好的实验性能。
内源 pink1 蛋白单克隆抗体及其应用

[发明专利]非人灵长类动物孤独症模型的构建方法-CN202310063170.3在审
发明人：李邦;杨伟莉;李晓江;罗涯锋;张家玮;涂著池;郭祥玉;殷鹏;李岳锋 -专利权人：暨南大学
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： A01K67/027 文献下载
摘要：本发明公开了一种非人灵长类动物孤独症模型的构建方法，该方法包括以下步骤：在雌性非人灵长类动物妊娠期第55±1天，向其胎儿侧脑室中注射CHD8sgRNA/Cas9病毒，然后正常饲养，待胎儿出生后即获得非人灵长类动物孤独症模型。本发明成功模拟了胚胎期进行CHD8基因突变造成灵长类动物大脑胶质细胞增生的重要病理特征，该方法便于批量建模，而目前并没有利用该建模方法研究CHD8基因突变在灵长类脑中的早期病理特征的相关报道。本发明采用胚胎脑基因编辑造成脑组织中CHD8基因突变,该项研究为深入探究灵长类脑中孤独症脑发育障碍机理、开发孤独症治疗靶点及临床前药物筛选提供了有效模型及重要方法。
非人灵长类动物孤独症模型构建方法

[发明专利]一种脑黑质基因敲除快速建立帕金森病动物模型的方法-CN201810756755.2有效
发明人：郭祥玉;杨伟莉;李世华;李晓江 -专利权人：暨南大学
申请日： 2018-07-11 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种脑黑质基因敲除快速建立帕金森病动物模型的方法。本发明公开了一种可高效特异敲除PINK1基因的sgRNA；还提供了通过靶向敲除动物中脑黑质的PINK1基因建立帕金森疾病动物模型的方法，具体通过将sgRNA和CRISPR核酸酶注射至动物大脑黒质部位，对PINK1基因造成目标片段缺失；3～4周后可出现明显帕金森疾病典型运动障碍症状，无药物治疗下运动障碍不可恢复。所述方法直接造成黑质部位神经元死亡，无副作用，成模率逾90％，表型稳定，适用性和重复性好，为帕金森病药物筛选、干细胞治疗、基因缺陷修复治疗及PINK1基因缺失的致病机理研究等提供重要模型，具有巨大的经济价值和临床前研究意义。
动物模型帕金森疾病基因敲除快速建立帕金森病脑黑质基因帕金森病药物致病机理研究干细胞治疗临床前研究神经元死亡不可恢复典型运动动物大脑基因缺失基因缺陷目标片段敲除动物药物治疗运动障碍障碍症状中脑黑质成模率核酸酶靶向表型黑质敲除注射筛选修复治疗

[发明专利]Cas9融合蛋白及其编码序列-CN201610038907.6有效
发明人：李晓江;涂著池;杨伟莉;郭祥玉;李世华 -专利权人：广州元曦生物科技有限公司;中国科学院遗传与发育生物学研究所
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2017-08-18 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种融合蛋白及编码融合蛋白的DNA序列。具体地，本发明提供了一种包括Cas9片段及Ubiquitin片段的Cas9融合蛋白及其编码序列。本发明一方面可以使得Cas9蛋白在胚胎细胞中发挥打靶作用之后迅速降解，从而降低了胚胎发育的嵌合突变效应。更重要的是，本发明所提供的Ubiquitin‑i‑Cas9(i为连接Ubiquitin和Cas9的连接子的首位氨基酸，其可以为精氨酸(R)或脯氨酸(P)或亮氨酸(L))蛋白可以提高基因打靶胚胎的纯合效率。尤其是特别优选的Ubiquitin‑R‑Cas9蛋白，其对野生型Cas9蛋白基因打靶效率提高了3.51倍。这是技术人员预期之外的。
cas9 融合蛋白及其编码序列

[发明专利]一种培养转基因动物胚胎细胞或转基因动物的方法及培养基-CN201510961256.3在审
发明人：李晓江;涂著池;杨伟莉;闫森;刘旭东;郭祥玉 -专利权人：广州元曦生物科技有限公司;中国科学院遗传与发育生物学研究所
申请日： 2015-12-17 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种培养转基因动物胚胎或制备转基因动物的方法及培养基。该方法包括将经基因修饰后的动物受精卵培育到四细胞阶段，去掉透明带，再去掉细胞间连丝，将4细胞胚胎分离为4个单卵裂球，进一步再将单个卵裂球细胞放回到去除胞质的透明带中，进行体外培养，高效获得纯合基因修饰的胚胎。发明同时提供了优化的培养基。本发明通过胚胎卵裂球分离再独立培养技术，能够在优化的胚胎培养体系中成功获得囊胚，效率为30.33％；其次，所获得的再分化胚胎纯合打靶效率较未分割前的发育胚胎相对明显增高，高达55.80％的纯合突变效率。
一种培养转基因动物胚胎细胞方法培养基