本发明提供一种检测高毒力肺炎克雷伯菌的荧光定量PCR引物组、试剂盒及应用。本发明针对高毒力肺炎克雷伯菌中编码铁摄取系统相关基因iucA、iroB，代谢转运相关基因peg‑344，荚膜多糖相关基因rmpA，分别设计了针对基因iucA的特异性引物SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6、针对iroB基因的特异性引物SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8、针对peg‑344基因的特异性引物SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10和针对rmpA基因的特异性引物SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12，建立了可检测肺炎克雷伯菌中高毒力相关基因iucA、iroB、peg‑344、rmpA的荧光定量PCR方法，通过对高毒力相关基因的检测来判定菌株为高毒力肺炎克雷伯菌或经典肺炎克雷伯菌。本发明方法采用闭管反应，基于熔解曲线峰进行结果判定，检测完毕直接处理，避免开盖造成气溶胶污染，可以快速、准确地进行高毒力肺炎克雷伯菌的检测。
本发明公开了一种基于CRISPR的检测替加环素耐药高毒力肺炎克雷伯氏菌的方法及试剂盒。所述引物对根据如SEQ ID NO:1–5所示的靶位点设计得到。crRNA探针根据如SEQ ID NO:6–10所示的靶向位点设计得到。一种基于CRISPR方式检测替加环素耐药高毒力肺炎克雷伯氏菌的试剂盒，其由冻干试剂1、2，缓冲液1、2，基因组DNA提取试剂1、2，紫光手电组成。利用基因组DNA提取试剂处理菌液；通过引物对、重组酶聚合酶和dNTP，扩增靶位点基因；借助Cas12蛋白，在crRNA探针指导下，结合靶位点双链DNA底物，激活非特异性切割单链DNA报告序列的特点而设计的一种高灵敏度、高特异性的快速、可视化检测替加环素耐药高毒力肺炎克雷伯氏菌的方法。
本发明公开了一种基于CRISPR的检测猪链球菌的方法、试剂盒、引物对及探针。所述引物根据如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的靶位点设计得到；crRNA探针根据如SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4所示的靶向位点设计得到。一种基于CRISPR方式检测猪链球菌的试剂盒，其由冻干试剂1，包括所述的引物、重组酶聚合酶、dNTP、crRNA探针、单链DNA报告序列；缓冲液1；冻干试剂2，包括所述的Cas12蛋白；缓冲液2；基因组DNA提取试剂1、2；紫光手电组成。利用基因组DNA提取试剂处理菌液；通过引物、重组酶聚合酶和dNTP，扩增靶位点基因；借助Cas12蛋白，在crRNA探针指导下，结合猪链球菌靶位点双链DNA底物，激活非特异性切割单链DNA报告序列的特点而设计的一种高灵敏度、高特异性的快速、可视化检测猪链球菌的方法。
