本发明涉及一种提取及培养小鼠高纯度原代肾小管上皮细胞的方法及培养基,该培养基由以下各原料混合而成:500 mL DMEM/Ham´s F12培养基、两性离子缓冲液5mL、胎牛血清50mL、庆大霉素500uL、两性霉素B 500uL、表皮生长因子50uL、胰岛素‑转铁蛋白‑硒添加剂50uL和激素混合物5mL。本发明还提供了使用上述培养基提取及培养高纯度原代肾小管上皮细胞的方法。有益效果为,采用本发明的高选择性的培养基,可提取及培养出纯度高达92%以上的小鼠原代肾小管上皮细胞,培养得到的高纯度原代肾小管上皮细胞是研究急性肾损伤或慢性肾脏病损伤机制的较好工具细胞。