本发明提供了一种禽偏肺病毒分型的多重荧光定量PCR检测的引物与方法。所述引物是根据禽偏肺病毒A亚型和B亚型的SH基因以及C亚型的P基因设计得到，所述引物包括aMPV‑A/B‑SH‑F、aMPV‑A‑SH‑R、aMPV‑B‑SH‑R、aMPV‑C‑SH‑F、aMPV‑C‑SH‑R，其引物序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。本发明提供的引物及检测方法可以快速准确鉴别检测禽偏肺病毒各基因型，能够检测出aMPV的A、B、C三种亚型，且对这三种亚型的最低检测限为1‑10拷贝/μL，其灵敏度高。
本发明提供一种以重组减毒单増李斯特菌为载体的结肠癌疫苗及制备方法，涉及基因工程领域，是以减毒单増李斯特菌背景菌株Lemo‑C07为背景载体，利用PCR技术扩增Lemo‑C07的hly基因498bp以及hly基因下游500bp分别作为片段A和片段B；利用SOE‑PCR技术将三个片段(抗原片段AH1设计在引物上)连在一起获得A‑B的目的片段，如序列SEQ ID NO.1所示；以KpnⅠ和PstⅠ为酶切位点，经酶切、酶连至李斯特菌穿梭质粒pKSV7，获得重组质粒pSL1885，并经质粒电转、同源重组和质粒丢失，获得重组减毒单増李斯特菌载体疫苗。将肿瘤特异性抗原基因整合至减毒李斯特菌基因组中，使抗原基因能够稳定表达，不易丢失；使用的减毒株Lemo‑C07与野生株相比，毒力降低了近10000倍；不含抗性质粒，无抗生素耐药风险，安全性更高。
