本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种能检测多种猪呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒包括：预扩增引物混合液，所含预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～14所示；探针混合液，包括左侧探针和右侧探针，序列如SEQ ID NO：15～28所示；MLPA缓冲液；连接缓冲液A；连接缓冲液B；连接酶Ligase‑65；PCR反应混合液，其包括如序列SEQ ID NO：29和30所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照。本发明具备高通量、特异性好、灵敏度高的特点；操作更简便，检测时间更短。
本发明提供一种以重组减毒单増李斯特菌为载体的结肠癌疫苗及制备方法，涉及基因工程领域，是以减毒单増李斯特菌背景菌株Lemo‑C07为背景载体，利用PCR技术扩增Lemo‑C07的hly基因498bp以及hly基因下游500bp分别作为片段A和片段B；利用SOE‑PCR技术将三个片段(抗原片段AH1设计在引物上)连在一起获得A‑B的目的片段，如序列SEQ ID NO.1所示；以KpnⅠ和PstⅠ为酶切位点，经酶切、酶连至李斯特菌穿梭质粒pKSV7，获得重组质粒pSL1885，并经质粒电转、同源重组和质粒丢失，获得重组减毒单増李斯特菌载体疫苗。将肿瘤特异性抗原基因整合至减毒李斯特菌基因组中，使抗原基因能够稳定表达，不易丢失；使用的减毒株Lemo‑C07与野生株相比，毒力降低了近10000倍；不含抗性质粒，无抗生素耐药风险，安全性更高。
