本发明公开了一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法,包括:步骤一:提取杀菌型乳制品的DNA,以杀菌型乳制品的DNA为模板,进行qPCR扩增,获得PCR扩增产物;步骤二:检测扩增产物的荧光信号;其中,用于qPCR扩增的反应体系中含有如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的扩增乳酸乳球菌的特异性引物对和如SEQ ID NO:3所示的乳酸乳球菌的特异性探针。本发明还公开了一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的特异性引物对和特异性探针、检测试剂盒及其应用。本发明的qPCR方法,可快速、简便地检测杀菌型乳制品中是否存在乳酸乳球菌以及定量检测杀菌型乳制品中的乳酸乳球菌的含量。