本发明提供了一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽及其应用。所述人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽包含两个、三个或四个人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成,其中所述抗原表位肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4。根据优化和筛选的HCMV重叠的T细胞表位,Th细胞表位和B细胞表位,本发明获得了四种HCMV优势抗原表位,其覆盖引起有效细胞免疫的PP65、PP150、IE1蛋白和引起有效体液免疫的gB、gH蛋白。包含该表位嵌合肽的疫苗在小鼠模型中具有良好的免疫原性及安全性,能够在短时间内引起体液免疫和细胞免疫反应。此外,该疫苗制备快速简便,成本较低,可在短时间内实现大规模生产。