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[发明专利]一种利用B2-YFP检测RSV在植物组织中分布的方法-CN202310760210.X在审
发明人：孙枫;陈丽;季英华 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2023-06-26 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用B2‑YFP检测RSV在植物组织中分布的方法。利用这一方法可以实时快速检测RSV(水稻条纹病毒)在植物不同组织中(根，茎，叶，花等)分布模式，进而采取针对性的防治策略，减少病害带来的损失。
一种利用 b2 yfp 检测 rsv 植物组织分布方法

[发明专利]一种检测黄瓜绿斑驳花叶病毒和小西葫芦黄花叶病毒的引物组、试剂盒-CN202211698983.1在审
发明人：杨柳;任春梅;缪倩;陆芳;程兆榜;季英华 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测黄瓜绿斑驳花叶病毒和小西葫芦黄花叶病毒的引物组、试剂盒。涉及植物病毒病害检测诊断技术领域。包括：C8F和C8R、Z10F和Z10R’，探针C8P、Z10P’。本发明与其他等温扩增技术相比较，更加简单方便、反应更加快速、准确、能更好的与检测平台结合等优点。与现有常用的的ELISA检测技术相比，具有更高的特异性和灵敏性。与传统RT‑PCR检测相比，操作步骤简单，不需要单独进行反转录步骤，与普通PCR相比，实验时间只有短短十几分钟，且不需要使用PCR仪这样的精密昂贵仪器。在同一条件体系下可以同时检测出是否感染CGMMV和/或ZYMV病毒。
一种检测黄瓜斑驳花叶病毒西葫芦引物试剂盒

[发明专利]一种基于病原菌线粒体基因组序列检测西瓜枯萎病、番茄枯萎病和莲藕腐败病病原的方法-CN202010379737.4有效
发明人：魏利辉;邓晟;周冬梅;冯辉;王晓宇;季英华 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2020-05-07 - 公布日： 2023-06-20 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过线粒体基因组差异序列快速鉴定(或区分)Fusarium commune和Fusarium oxysporum菌株的方法。本发明还公开了利用上述差异序列接合环介导等温扩增(Loop‑mediated isothermal amplification，缩写为LAMP)技术可以在活体植株的维管束渗出液或活体材料上直接进行检测，免除了核酸提取过程的繁琐步骤。接合植株的发病症状，本发明可以快速确诊西瓜枯萎病、番茄枯萎病和莲藕腐败病的病原，可用于相关作物病害的预测预报，为相关病害的防控赢得宝贵时间，减少病害发生造成的损失。
一种基于病原菌线粒体基因组序列检测西瓜枯萎病番茄莲藕腐败病原方法

[发明专利]PI4KIIa在控制灰飞虱传播水稻黑条矮缩病毒中的应用-CN202211240461.7在审
发明人：董岩;王海涛;季英华;孙枫;徐秋芳 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-10-11 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了PI4KIIa基因在调控灰飞虱传播水稻黑条矮缩病毒中的应用。本发明筛选了一种与灰飞虱传播RBSDV相关的基因，下调PI4KIIa表达，有效抑制灰飞虱传毒，减轻水稻发病。
pi4kiia 控制灰飞虱传播水稻黑条矮缩病毒中的应用

[发明专利]一种利用二氢卟吩铁提高植物对病毒病抗性的方法-CN202310188042.1在审
发明人：李硕;季英华;魏利辉;靳道然 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2023-02-28 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： A01N43/90 文献下载
摘要：针对目前生产上植物病毒病防控药剂匮乏的问题，本发明提供了一种利用二氢卟吩铁提高植物对病毒病抗性的方法，属于农业科学植物保护领域。植物接种植物病毒(包括RNA病毒和DNA病毒)后，以一定浓度的二氢卟吩铁喷施植株叶片，连续用药2次，发现与对照组(喷施清水)相比，二氢卟吩铁400‑1000mg/L(制剂浓度，每克制剂含二氢卟吩铁0.2mg，折有效成分浓度为0.08‑0.2mg/L)处理的植株病毒病抗性水平明显提升，病害症状明显减轻或消除，植株体内病毒积累量显著降低，其中施药浓度1000mg/L效果达到最好。利用本方法处理的植物，其病毒病抗性水平显著提升。这一方法简便、经济、绿色、高效，可直接应用于农业生产及相关研究领域，对于高效环保地保障农作物的健康生长具有重要意义。
一种利用卟吩提高植物病毒抗性方法

[发明专利]一种基于快速沉降病毒直接PCR检测植物病毒的方法-CN202211290271.6在审
发明人：李硕;靳道然;季英华;卢成晔;任春梅 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-10-20 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：针对目前植物病毒检测中核酸提取步骤冗繁的问题，本发明建立了一种基于低温预冷无水乙醇快速沉降病毒粒子检测植物病毒的方法。充分研磨获得的植物组织上清液中加入等体积预冷无水乙醇，冰浴后12000rpm离心沉降病毒粒子，70％乙醇洗涤后，加入无核酶去离子水溶解沉淀，100℃水浴后立即冰浴，即获得病毒基因组溶液，作为模板直接用于PCR、RT‑PCR和荧光定量PCR反应检测病毒。使用本方法可以快速从植物样品中检测多种植物病毒，包括DNA和RNA病毒。本发明方法不需要冗繁步骤来分离提取待检测样品的DNA或RNA，能在较短时间内获得满足PCR反应的病毒基因组作为模板，简便快捷、广谱性高、无需使用有毒化学试剂，节省了成本，降低了对实验人员的伤害和环境的污染，大大提高了植物病毒检测的效率和准确性，对于大规模快速检测植物病毒具有重要意义。这一方法可应用于植物病毒的诊断鉴定、流行监测以及植物病毒侵染寄主机制研究工作。
一种基于快速沉降病毒直接 pcr 检测植物方法

[发明专利]一种利用二氢卟吩铁促进水稻种子萌发和幼苗生长的方法-CN202111155613.9在审
发明人：李硕;魏利辉;季英华;谢亚丽 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-09-29 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： A01C1/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用二氢卟吩铁促进水稻种子萌发和幼苗生长的方法，属于农业科学植物生长调节领域。二氢卟吩铁分别以梯度浓度和梯度时间对水稻种子进行浸种处理，发现与对照组(清水和助剂浸种处理)相比，二氢卟吩铁制剂浸种提高了水稻种子发芽率，增加了幼苗根重，提升了幼苗叶片叶绿素含量，其中浸种浓度100‑200mg/L(为制剂浓度，每克制剂含二氢卟吩铁0.2mg)、浸种时间24‑48小时，效果达到最好。利用本方法处理的水稻种子，种子萌发和幼苗生长指标显著提升。这一方法简便、经济、绿色、高效，可直接应用于农业生产及相关研究领域，更加高效环保地保障粮食作物的生产。
一种利用卟吩促进水稻种子萌发幼苗生长方法

[发明专利]一种可阻断灰飞虱传播水稻条纹病毒水稻材料的创制方法-CN202111083332.7在审
发明人：李硕;卢成晔;季英华;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-09-15 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供了一种可阻断灰飞虱传播水稻条纹病毒水稻材料的创制方法，属农业科学技术领域。根据水稻条纹病毒(RSV)糖蛋白NSvc2‑N介导病毒侵染介体灰飞虱中肠这一特点，选取其中的NSvc2‑NS片段(720bp，编码NSvc2‑N的可溶性区段，即30‑268位氨基酸)作为外源基因，通过转基因技术整合入水稻基因组，获得的转基因水稻植株可显著降低灰飞虱的获毒率、虫体内病毒含量以及传毒率，证明了转基因植株内表达的NSvc2‑NS蛋白可竞争结合位于介体灰飞虱中肠的病毒侵染位点，从而实现阻断灰飞虱传播病毒。这一方法填补了利用植株自身去阻断灰飞虱传毒技术上的空白，与传统的“控虫防病”方法相比，本方法简便、经济、绿色、高效，可应用于抗病毒育种工作、病害防控研究以及昆虫传播病毒机制研究等领域。
一种阻断灰飞虱传播水稻条纹病毒材料创制方法

[发明专利]利用基因编辑技术提高水稻植株对水稻黑条矮缩病毒抗性-CN202111125362.X在审
发明人：孙枫;汪微;马淑慧;季英华 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-09-24 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用基因编辑技术提高水稻植株对水稻黑条矮缩病毒抗性的方法。利用这一方法可以快速培育高抗水稻黑条矮缩病的水稻品种，减少病害带来的损失。
利用基因编辑技术提高水稻植株黑条矮缩病毒抗性

[发明专利]一种用于检测CGMMV的金标速测卡及其制备方法-CN202110328676.3在审
发明人：任春梅;吴蔚;程兆榜;季英华;杨柳;缪倩;李硕;陆芳 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-03-26 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于检测CGMMV的金标速测卡及其制备方法，其中金标速测卡包括外壳以及检测卡；壳体上设置有观察窗以及加样孔；检测卡包括底板、样品垫、标记垫以及硝酸纤维素膜；标记垫上涂覆有探针一，探针一由胶体金标记；硝酸纤维素膜上间隔设置有检测线T和质控线C；检测线T上包被有探针二，探针二由巯基标记；质控线C上包被有BSA抗体。该用于检测CGMMV的金标速测卡及其制备方法与现有的PCR检测方法相比，操作简单，不需要专门的仪器设备，不需要进行PCR扩增，可对样本中CGMMV进行快速、灵敏的现场检测。
一种用于检测 cgmmv 金标速测卡及其制备方法

[发明专利]一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法-CN201910929829.2在审
发明人： 季英华;涂丽琴;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-09-27 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒核苷酸序列设计三条引物，[A]TYTO_R，[B]TY_F，[C]To_R，其中A/C组合检测番茄褪绿病毒，A/B组合检测番茄黄化曲叶病毒。样品提取总RNA后，只需一次RT‑PCR，即可检测番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒两种病毒，实现了两种病毒的鉴别。由于番茄黄化曲叶病毒是一种DNA病毒，番茄褪绿病毒是一种RNA病毒，因此传统的检测方法往往需要分别提取DNA和RNA进行检测，该方法仅需提取样品RNA，即可实现两种病毒的同步检测，大大减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。
番茄黄化曲叶病毒病毒番茄检测组合检测植物保护领域核苷酸序列快速鉴别同步检测样品提取提取DNA 传统的总RNA 引物灵敏鉴别节约

[发明专利]一种葫芦的组培快繁方法-CN201910095750.4在审
发明人：缪倩;程兆榜;任春梅;季英华;杨柳 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-01-31 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种葫芦组培快繁方法，涉及植物组织培养技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将去壳的葫芦种子消毒，接种到无菌苗固体培养基表面进行无菌苗培养，得无菌苗；2)剥离所述无菌苗的子叶节，将所述子叶节接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；3)分离所述丛生芽后接种于生根培养基中进行生根培养，得葫芦组培快繁苗。利用本发明所述方法，2个月内获得大量遗传性状一致的葫芦成苗；同时增殖系数最高达2.27，生根率最高达95％。本发明所述方法为葫芦的细胞工程和转基因改良育种提供了方法基础，同时为规模化生产高品质葫芦砧木苗提供参考。
葫芦组培快繁无菌苗接种丛生芽子叶节丛生芽诱导培养基植物组织培养技术固体培养基表面规模化生产生根培养基无菌苗培养葫芦种子生根培养细胞工程遗传性状诱导培养增殖系数高品质生根率砧木苗转基因成苗去壳剥离消毒育种改良参考

[发明专利]一种利用RT-LAMP快速检测烟草轻型绿花叶病毒的方法-CN201510518332.3在审
发明人： 季英华;赵文浩;吴淑华;李廷芳;杜琳琳;周彤;程兆邦;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2015-08-20 - 公布日： 2016-02-17 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种快速检测烟草轻型绿花叶病毒的方法，属植物保护领域。根据烟草轻型绿花叶病毒核苷酸序列设计RT-LAMP引物(TMG2-F3，TMG2-B3，TMG2-FIP，TMG2-BIP)。样品提取总RNA后，进行RT-LAMP反应，反应产物经电泳或者荧光染料的方法实现烟草轻型绿花叶病毒的检测。该方法操作简单，无需PCR仪等特殊仪器，同时又克服了传统的生物学、血清学等方法上存在的问题，是一种简捷、快速、灵敏而经济的检测方法。
一种利用 rt lamp 快速检测烟草轻型花叶病毒方法

[发明专利]一种快速检测灰飞虱体内水稻条纹病毒和水稻黑条矮缩病毒的方法-CN201410330961.9有效
发明人：李硕;季英华;王喜;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2014-07-09 - 公布日： 2014-11-12 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种快速同步检测昆虫介体灰飞虱体内水稻条纹病毒(RSV)和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的方法，属植物保护领域。根据水稻条纹病毒RNA4和水稻黑条矮缩病毒S2核苷酸序列设计三条引物：[A]RS-F，[B]RB-F，[C]RSRB-R，其中A/C组合检测水稻条纹病毒，B/C组合检测水稻黑条矮缩病毒。单头灰飞虱提取总RNA后，只需一个反应的RT-PCR，即可检测水稻条纹病毒和水稻黑条矮缩病毒两种病毒，实现了灰飞虱体内两种病毒的快速同步检测。相对于传统的一次RT-PCR反应检测一种病毒的方法，大大节约了成本，节省了时间，是一种快速、简便、灵敏、特异的检测方法。本方法可应用于田间灰飞虱群体带毒率的监测工作，也可应用于病毒与介体互作机制的相关研究工作。
一种快速检测灰飞虱体内水稻条纹病毒黑条矮缩方法

[发明专利]一种快速同步检测小麦黄花叶病毒和中国小麦花叶病毒的方法-CN201310000432.8有效
发明人：缪倩;季英华;任春梅;魏利辉;周益军;程兆榜 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2013-01-05 - 公布日： 2013-05-15 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速同步检测小麦黄花叶病毒和中国小麦花叶病毒的方法，根据两种病毒基因序列的异同点设计了三条引物反向引物CWWY-R2为：5′-GGTTCCMGTTATCGTACT-3′。正向引物CW1-F2：5′-GGAAGGGATGCCATACAACT-3′，WY1-F2：5′-ACCCTACAAACAAACTCTGC-3′，植物总RNA为模板，以CWWY-R2为引物，反转录合成cDNA。然后通过优化建立了一种同步检测两种病毒的反应体系：cDNA1.6μL、引物(10μmol/L)各0.4μL、10×PCR Buffer(不含Mg2+)2μL、dNTPs(10mmol/L each)0.4μL、Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.8μL、MgCl2(25mmol)0.8μL、ddH2O 13.2μL合计20μL；PCR反应条件：94℃预变性5min、94℃50s、50℃50s、72℃90s共30个循环，72℃延伸10min。PCR扩增预期目的片段分别为WYMV 508bp、CWMV 918bp。利用该方法对江苏高邮、扬州和大丰的样本进行检测，分别为WYMV、WYMV、CWMV单一侵染。
一种快速同步检测小麦花叶病毒中国方法

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