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[发明专利]提高微生物菌体和/或微生物油脂中多不饱和脂肪酸含量的调控方法及应用-CN202310899251.7有效
发明人： 孙小曼;郭东升;黄和;李颖风;马旺 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-07-21 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N1/12 文献下载
摘要：本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种提高微生物菌体和/或微生物油脂中多不饱和脂肪酸含量的调控方法及应用。该调控方法包括：将所述产油微生物进行发酵培养，在所述发酵培养的过程中添加调节剂，其中，所述调节剂选自替格列卡、马来酸哌克昔林、丙二酰辅酶A锂盐、帕莫酸甲酯、卡巴环素、哌克昔林、乙莫克舍和乙莫克舍钠盐中的至少一种。本发明还提供微生物菌粉的制备方法以及微生物油脂的制备方法。本发明提供的调控方法能够促进微生物生长过程中甘油三酯的重排，提高油脂产量和油脂中多不饱和脂肪酸的含量。
提高微生物菌体油脂不饱和脂肪酸含量调控方法应用

[发明专利]一种过表达DHA合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用-CN202310487923.3在审
发明人：黄和;贾雨雷;孙小曼;许莹霜;马旺 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-05-04 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种过表达DHA合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株，所述基因工程菌株为裂殖壶菌中过表达DHA合酶基因形成的工程菌株，所述DHA合酶基因含有orfA基因、orfB基因和orfC基因。本发明裂殖壶菌基因工程菌株通过将orfA基因表达盒、orfB基因表达盒和orfC基因表达盒插入裂殖壶菌基因组中，以使得在裂殖壶菌中过表达DHA合酶基因，获得的基因工程菌株具有高效合成DHA的能力，能够有效提高DHA的产量，降低DHA的生产成本，为DHA的大规模工业化生产奠定了基础。
一种表达 dha 基因裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种溶血磷脂酸酰基转移酶突变体及其应用-CN202210317934.2有效
发明人：黄和;孙小曼;马旺;郭东升 -专利权人：南京脂禾生物科技有限公司
申请日： 2022-03-29 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种溶血磷脂酸酰基转移酶突变体，该溶血磷脂酸酰基转移酶突变体是通过突变技术对裂殖壶菌溶血磷脂酸酰基转移酶进行以下位点的突变改造得到：第106位氨基酸由亮氨酸突变为精氨酸，第113位氨基酸由苏氨酸突变为丝氨酸，第131位氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸，第216位氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸，第261位氨基酸由苏氨酸突变为脯氨酸；本发明还提供了上述溶血磷脂酸酰基转移酶突变体的应用，通过发酵生产EPA和TAG。本发明实现了提高裂殖壶菌中EPA和TAG含量的目的。本发明提供的溶血磷脂酸酰基转移酶突变体的编码基因用于构建工程菌，构建的工程菌进一步应用于EPA和TAG的生产。
一种溶血磷脂酸转移酶突变体及其应用

[发明专利]一种通过敲除转录因子促进生产β-胡萝卜素的裂殖壶菌工程菌株、方法和应用-CN202310145000.X在审
发明人：黄和;孙小曼;闫春晓;郭东升;马旺 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-02-21 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过敲除转录因子促进生产β‑胡萝卜素的裂殖壶菌工程菌株，所述工程菌株是通过敲除裂殖壶菌HX‑308基因组上转录因子A1189基因、A9257基因获得的，实现在细胞水平对裂殖壶菌代谢流进行全局调控，促进裂殖壶菌β‑胡萝卜的积累；其中，A1189基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，A9257基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。本发明避开了传统代谢工程策略，通过调控转录因子，实现对细胞全局性的调控，促进β‑胡萝卜素的积累。
一种通过转录因子促进生产胡萝卜素裂殖壶菌工程菌株方法应用

[发明专利]一种裂殖壶菌基因工程菌株、其构建方法及其应用-CN202111578373.3有效
发明人： 孙小曼;马旺;向罗平;许莹霜;汪庆卓 -专利权人：南京脂禾生物科技有限公司
申请日： 2021-12-22 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法，该裂殖壶菌基因工程菌株以Schizochytrium sp.HX‑308菌株为出发菌株，在出发菌株中多拷贝表达二十碳五烯酸合成途径中的酰基‑ACP硫脂酶基因TE；本发明也公开了上述裂殖壶菌基因工程菌株的一种应用，通过发酵生产二十碳五烯酸。本发明通过过表达酰基‑ACP硫脂酶基因TE，实现了提高基因工程菌株中二十碳五烯酸产量的目的，适用于构建裂殖壶菌基因工程菌株，构建出的裂殖壶菌基因工程菌株可用于二十碳五烯酸的生物合成。
一种裂殖壶菌基因工程菌株构建方法及其应用

[发明专利]一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法-CN202310219184.X有效
发明人： 孙小曼;闫春晓;黄和;郭东升;李颖风;顾洋 -专利权人：南京脂禾生物科技有限公司
申请日： 2023-03-09 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C07K5/037 文献下载
摘要：本发明公开了一种谷胱甘肽粗提物、复合天然抗氧化剂、应用及提高鱼油货架期的方法，所述谷胱甘肽粗提物是通过酿酒酵母发酵获得的。利用所述的谷胱甘肽粗提物的用于延长鱼油货架期的复合天然抗氧化剂，所述抗氧化剂由以下成分组成：植酸、谷胱甘肽粗提物和迷迭香。本发明通过单因素试验和正交试验相结合的方式，筛选获得一种复合天然抗氧化剂，该抗氧化剂能够有效维持鱼油氧化稳定性，该抗氧化剂能够实现鱼油的货架期由15天延长至30天。
一种谷胱甘肽粗提物复合天然抗氧化剂应用提高鱼油货架方法

[发明专利]高效利用丙酸盐的裂殖壶菌、应用和处理丙酸盐废水并积累高价值DHA的方法-CN202310313325.4在审
发明人： 孙小曼;张自夷;马旺;郭东升;李颖风 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-03-28 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一株高效利用丙酸盐的裂殖壶菌、应用和处理丙酸盐废水并积累高价值DHA的方法，所述裂殖壶菌是通过丙酸盐废水为基础，利用丙酸钠梯度配制2g/L、4g/L、6g/L、8 g/L的丙酸盐废水，使用该丙酸盐废水作为溶剂配制完全取代培养基对裂殖壶菌进行适应性驯化获得的。本发明在裂殖壶菌培养的基础上，采用适应性实验室进化手段，获得了一株高耐受丙酸盐废水的裂殖壶菌菌株，该菌株能够高效利用丙酸盐，且获得的菌株具有多次传代的稳定性。
高效利用丙酸裂殖壶菌应用处理废水积累价值 dha 方法

[发明专利]一种无需使用有机溶剂的裂殖壶菌脂质提取方法和应用-CN202310122968.0有效
发明人：黄和;孙小曼;闫春晓;马旺;郭东升 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-02-16 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C11B1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种无需使用有机溶剂的裂殖壶菌脂质提取方法和应用，所述方法包括如下步骤：裂殖壶菌种子液培养；获得第三代种子液；接种到裂殖壶菌的发酵培养基中，培养，收集发酵液；调节发酵液pH；加入破壁酶处理；萃取；将复合表面活性剂添加至发酵液中，混合均匀，离心；静止分层；离心取上清液；旋蒸；烘干，获得总脂质。本发明方法在脂质提取过程中，将有机溶剂正己烷更换为一种复合表面活性剂，促进了脂质提取。本发明方法优化了裂殖壶菌脂质提取工艺，在脂质提取过程中，避免了有机溶剂的加入，提高了脂质安全性，扩展了脂质产品的市场应用范围，同时，本发明操作简便易行，具有较强的普适应。
一种无需使用有机溶剂裂殖壶菌脂质提取方法应用

[发明专利]一种高效生产EPA的裂殖壶菌基因工程菌株、方法和应用-CN202211125899.0在审
发明人：黄和;孙小曼;李进;马旺 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-09-16 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效生产EPA的裂殖壶菌基因工程菌株、方法和应用，所述工程菌株是通过在裂殖壶菌野生型中过表达MetE‑like结构域中的基因AT、KS或AT‑KS获得的；其中，所述基因AT的基因序列为SEQIDNO.13，所述基因KS的基因序列为SEQIDNO.14，所述基因AT‑KS的基因序列为SEQIDNO.15。本发明通过在裂殖壶菌野生型中过表达MetE‑like结构域中的AT、KS和AT‑KS基因获得裂殖壶菌基因工程菌株，可以明显提高EPA积累，这为该菌株工业化定向合成EPA提供了基础。
一种高效生产 epa 裂殖壶菌基因工程菌株方法应用

[发明专利]一种芝麻酚在提高裂殖壶菌中角鲨烯产量的应用和方法-CN202310123047.6有效
发明人： 孙小曼;李进;马旺;许莹霜;黄鹏伟 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-02-16 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12P5/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种芝麻酚在提高裂殖壶菌中角鲨烯产量的应用和方法，利用芝麻酚培养裂殖壶菌提高角鲨烯产量的方法，所述方法包括以下步骤：将裂殖壶菌菌株接种于种子培养基中，进行活化，并将得到的活化菌转接于种子培养基以获得一代种子；将一代种子接种于种子培养基中再次培养获得二代种子；将获得的二代种子接种于种子培养基中再次培养获得三代种子；将三代种子转接于含芝麻酚的发酵培养基中进行发酵培养，以产生角鲨烯。本发明首次提出了添加一种新的外源化合物可以控制裂殖壶菌发酵过程中角鲨烯的含量，这种外源化合物就是芝麻酚，与未加芝麻酚的对照组相比，加入不同浓度的芝麻酚的实验组中裂殖壶菌的角鲨烯的含量均能提高。
一种芝麻提高裂殖壶菌中角鲨烯产量应用方法

[发明专利]提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法-CN202211616720.1有效
发明人：黄和;施天穹;郭琪;聂志奎;孙小曼 -专利权人：南京师范大学;江西新瑞丰生化股份有限公司
申请日： 2022-12-16 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12P27/00 文献下载
摘要：本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种提高赤霉菌中赤霉素GA3含量的方法。该方法包括：将赤霉菌接入到含有调节因子的培养基中进行发酵；所述调节因子选自氯贝丁酯、芳氧苯氧丙酸酯、烯草酮和环己二酮中的至少一种。该方法能够有效提高赤霉菌中赤霉素GA3的含量，进而提高赤霉素GA3的产量。
提高霉菌赤霉素 ga3 含量方法

[发明专利]吗啡啉在控制裂殖壶菌发酵过程中不皂化物含量、提高DHA油脂的含量中的应用-CN202011563470.0有效
发明人：黄和;杜菲;孙小曼;许莹霜;王伶如 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种吗啡啉在控制裂殖壶菌发酵过程中不皂化物含量、提高DHA油脂的含量中的应用，本发明通过在裂殖壶菌发酵过程中外源添加吗啡啉来降低裂殖壶菌发酵过程中甾醇含量且提高油脂含量，并通过裂殖壶菌的细胞生长的生物量、油脂产量以及不皂化物含量指标来确定吗啡啉的最佳添加浓度，与未添加相比，添加1.8g/L的吗啡啉的甾醇含量降低了64.86％，油脂产量提高了67.51％，DHA含量提高了25.5％，虾青素含量提高了85％，显著提高了裂殖壶菌产DHA油脂和虾青素的含量。本发明首次将吗啡啉应用到裂殖壶菌不皂化物含量的调控中，为提高裂殖壶菌中油脂的含量提供了新的思路，在工业化生产方面存在巨大的潜力。
吗啡控制裂殖壶菌发酵过程皂化含量提高 dha 油脂中的应用

[发明专利]提高微生物中多不饱和脂肪酸产量的方法和微生物油脂的制备方法-CN202210907721.5在审
发明人：黄和;杨林晖;郭东升;刘孟珍;孙小曼 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-07-29 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12P7/6427 文献下载
摘要：本发明涉及微生物发酵技术，公开了一种提高微生物中多不饱和脂肪酸产量的方法和微生物油脂的制备方法。提高微生物中多不饱和脂肪酸产量的方法包括：将产油微生物接入添加有四环素的培养基中进行培养。微生物油脂的制备方法包括：将产油微生物采用上述提高微生物中多不饱和脂肪酸产量的方法进行培养得到培养液，将所述培养液进行破壁、提取得到提取液，将所述提取液进行干燥。本发明提供的方法能够有效提高微生物油脂中多不饱和脂肪酸的含量，简单高效且成本低。
提高微生物不饱和脂肪酸产量方法油脂制备

[发明专利]提高裂殖壶菌的DHA产量的方法和微生物油脂的制备方法-CN202210516989.6有效
发明人：黄和;陈子雷;郭东升;刘孟珍;孙小曼;李颖风 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-05-13 - 公布日： 2022-08-16 - 主分类号： C12P7/6434 文献下载
摘要：本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种提高裂殖壶菌的DHA产量的方法，该方法包括：将裂殖壶菌接种至种子培养基中进行种子培养后得到种子液，将所述种子液以体积比0.5‑10%接种至添加有辅助因子的发酵培养基中进行发酵培养；所述辅助因子为N,N‑二氧喹恶啉‑2‑甲醛和/或3‑甲基‑喹恶啉‑2‑羧酸，相对于1L的所述发酵培养基，所述辅助因子的添加量为10‑200μmol。此外，本发明还公开了一种微生物油脂的制备方法。该提高裂殖壶菌的DHA产量的方法能够提高裂殖壶菌中DHA的产量。
提高裂殖壶菌 dha 产量方法微生物油脂制备

[发明专利]提高产油微生物的油脂产量的方法和微生物油脂的制备方法-CN202210464418.2在审
发明人：汪庆卓;孙小曼;徐少元;耿珊珊 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-04-28 - 公布日： 2022-08-05 - 主分类号： C12P7/6427 文献下载
摘要：本发明涉及微生物油脂，公开了一种提高产油微生物的油脂产量的方法和微生物油脂的制备方法。提高产油微生物的油脂产量的方法包括：将产油微生物与纳米量子点进行偶联形成量子点复合菌体，将所述量子点复合菌体接种至培养基中在光照条件下进行培养。微生物油脂的制备方法包括：将产油微生物采用前述的方法进行培养得到培养液，将所述培养液进行破壁、提取。该方法能够促进产油微生物高效合成油脂，有效提高油脂的产量。
提高产油微生物油脂产量方法制备

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