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[发明专利]CD34+-CN202210630366.1有效
发明人：杜如龙;顾雨春;武雪宁;于蕾;黄雯静;吴理达 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2022-06-06 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种诱导多能干细胞分化为CD34+细胞的培养基组合、试剂盒、方法及其应用。此外本发明还提供了一种CD34+细胞群体及衍生物以及药物组合物。本发明仅通过CHIR99021激活WNT信号通路即可实现中胚层的高效诱导，而无须添加BMP4、VEGF；在造血中胚层阶段协同使用VEGF和bFGF，大大提高分化效率。本发明的培养基组合、试剂盒成分简单、成本低、易操作、诱导时间短，有利于规模化和产业化。
cd34 base sup

[发明专利]一种细胞外泌体提纯装置及方法-CN202011084318.4有效
发明人：顾雨春 -专利权人：北京诺德观呈医疗科技有限公司;北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2020-10-12 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本发明涉及一种细胞外泌体提纯装置及方法，提纯装置包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，第一中空纤维柱内腔两端分别与原液瓶连通形成精滤回路，第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，滤液管路上连接有第一手动夹；精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，浓缩回路上在中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵。本发明的提纯装置，将外泌体细胞原液先经过第一中空纤维柱进行过滤，然后再通过第二中空纤维柱进行浓缩，适用于大规模大量的上清液持续自动上样浓缩，大大节省了人工操作时间，可大规模制备含有外泌体的上清液，实现外泌体制备的标准化。
一种细胞外泌体提纯装置方法

[发明专利]影响细胞因子分泌的方法及应用-CN202210221425.X有效
发明人：吴理达;顾雨春 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2022-03-09 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明属于生物医学领域，具体涉及光照在影响细胞因子分泌中的应用。具体地，本发明提供了全光谱LED光在促进眼周细胞分泌细胞因子中的应用，所述细胞因子包括CNTF、PEDF、多巴胺。
影响细胞因子分泌方法应用

[发明专利]培养基及其应用与诱导性多能干细胞向胰岛分化的方法-CN202011072677.8有效
发明人：吴理达;顾雨春;张会远;安翠平 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2020-10-09 - 公布日： 2022-08-16 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及培养基及其应用与诱导性多能干细胞向胰岛分化的方法。本发明提供的分化方法中，从iPS干细胞到胰腺祖细胞的分化过程需要14天(2周)的时间。主要分为四个步骤：定向内胚层→原肠管→后前肠→胰腺祖细胞。从胰腺祖细胞到功能性胰岛的分化过程大约需要31天(1个月)的时间。主要分为三步：内分泌祖细胞→早期胰岛→晚期功能成熟的胰岛。上述各个步骤都需要特定的诱导培养基，这些培养基由基础培养基添加相应的诱导因子而实现，并且需要每天更换相应的诱导培养基进行培养。该方法诱导全程不需要饲养层细胞，所采用的培养基中也不含有任何动物源的成分，降低了异源免疫风险。
培养基及其应用诱导性多能干细胞胰岛分化方法

[发明专利]药物组合制剂在制备治疗2019-nCoV感染重症患者药物中的应用-CN202110396734.6在审
发明人：顾雨春;刘晓庆;毛淦明 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2021-04-13 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明公开了药物组合制剂在制备治疗2019‑nCoV感染重症患者药物中的应用，属于药物技术领域。本发明首次发现ACE‑h i s MSC和CAR‑NK ant i Hi s联用，可以用于制备治疗2019‑nCoV感染重症患者的药物，既开拓了ACE‑h i s MSC和CAR‑NK ant i Hi s新的应用领域，也开拓了新的治疗2019‑nCoV感染重症患者的药物，具有积极的药学价值和广泛的社会意义。
药物组合制剂制备治疗 2019 ncov 感染重症患者中的应用

[实用新型]一种细胞外泌体提纯装置-CN202022254333.0有效
发明人：顾雨春 -专利权人：北京诺德观呈医疗科技有限公司;北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2020-10-12 - 公布日： 2021-07-13 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种细胞外泌体提纯装置，包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，第一中空纤维柱内腔两端分别与原液瓶连通形成精滤回路，第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，滤液管路上连接有第一手动夹；精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，浓缩回路上在所述中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵。本实用新型的提纯装置，将外泌体细胞原液先经过第一中空纤维柱进行过滤，然后再通过第二中空纤维柱进行浓缩，适用于大规模大量的上清液持续自动上样浓缩，大大节省了人工操作时间，可大规模制备含有外泌体的上清液，实现外泌体制备的标准化。
一种细胞外泌体提纯装置

[发明专利]一种细胞培养实验室综合管理系统及方法-CN201710613523.7有效
发明人：顾雨春;刘晓庆 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2017-07-25 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： G06Q10/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种细胞培养实验室综合管理系统及方法。该方法通过合理的功能设计、系统模块设计，有效地实现对细胞培养实验全流程综合管理，实现整个流程前、中、后端的电子化，提高工作效率，并采用面向接口设计的系统架构，有效地兼容各种操作终端的接入，适应现代实验室多种移动场景的使用需求，实现多终端协同管理。针对细胞培养过程管理，进行实时监控记录，培养数据实时上传，保证整个培养过程符合生产要求，针对细胞培养质控管理，通过设备使用、耗材使用、检测记录等数据和记录的实时录入，保证可追溯性，确保生产细胞质量。
一种细胞培养实验室综合管理系统方法

[发明专利]一种使用ESRG基因作为通用标记基因的iPSC残留检测方法-CN202010813518.2在审
发明人：吴理达;顾雨春;冯铁军 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2020-08-13 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明的使用ESRG基因作为通用标记基因的iPSC残留检测方法，通过qPCR检测方法定量检测样品中的ESRG基因数量，从而检测样品中的iPSC残留。该方法采用ESRG基因片段作为通用标记基因，可以针对包括内皮祖细胞、神经干细胞、视网膜色素上皮细胞、肝细胞、自然杀伤细胞、心肌细胞以及胰岛小体等一系列细胞进行检测，不需要更换标记基因；同时能够在短时间内进行检测，大大提高了检测效率。本发明的方法在检测时，仅需要mRNA提取、反转录以及qPCR试剂，成本低，准确性高。
一种使用 esrg 基因作为通用标记 ipsc 残留检测方法

[发明专利]一种克隆细胞挑选方法及装置-CN202010554263.2在审
发明人：顾雨春;刘晓庆;毛淦明 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种克隆细胞挑选方法及装置，方法包括：获取含有克隆细胞的第一多孔板的照片；根据用户输入的挑取克隆细胞的形状信息，从所述照片中选择相应的克隆细胞；根据所述选择的克隆细胞在所述第一多孔板的孔位，生成控制克隆细胞挑选装置中的电动吸头部件以及电动平移运动部件进行运动的第一控制指令；其中，所述电动平移运动部件载有所述第一多孔板；根据所述第一控制指令，控制所述吸头吸取所述第一多孔板的孔位内的克隆细胞。
一种克隆细胞挑选方法装置

[发明专利]一种诱导性多能干细胞向成熟内皮细胞高效分化的方法-CN201810128553.3有效
发明人：顾雨春;张会远;谭声江 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2020-04-21 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种诱导性多能干细胞向成熟内皮细胞高效分化的方法，属于细胞工程技术领域。其包括如下步骤：诱导多能干细胞预处理培养；诱导形成侧板中胚层细胞；诱导形成内皮细胞倾向的内皮祖细胞；诱导形成成熟内皮细胞。本发明通过增减搭配多种细胞诱导因子，并在诱导方法上进行合理升级，可以高效诱导诱导多能干细胞向内皮细胞定向分化，在采用少量诱导多能干细胞且不需要纯化操作的条件下，即可获得大量纯度高、功能完善的成熟内皮细胞。
一种诱导性多能干细胞成熟内皮细胞高效分化方法

[发明专利]一种新的ips细胞的诱导方法-CN201910110768.7在审
发明人：顾雨春;吴理达 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2019-02-12 - 公布日： 2019-06-21 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种新的ips细胞的诱导方法。本发明提供了诱导因子Oct3/4、Klf4、Sox2、P53、L‑Myc、Lin28、RARg和Lrh‑1在诱导离体哺乳动物体细胞产生iPS多能干细胞中的应用。本发明建立iPS细胞的方法，在无插入的基础上建立了无外源血清，无滋养层细胞，无动物源的人iPS干细胞的诱导方法；该方法缩短了iPS多能干细胞的重编程时间，提高了克隆产生效率，得到的iPS细胞干性更好。
诱导多能干细胞哺乳动物体细胞无滋养层诱导因子动物源干细胞重编程血清干性离体外源克隆细胞应用

[发明专利]一种针对多发性骨髓瘤的CAR-NK细胞制备方法-CN201910128781.5在审
发明人：顾雨春;尹乐 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2019-02-21 - 公布日： 2019-05-31 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种针对多发性骨髓瘤的CAR‑NK细胞制备方法。该方法包括如下步骤：使NK细胞表达融合蛋白，得到针对多发性骨髓瘤的CAR‑NK细胞；所述融合蛋白为将NK细胞表面激活受体CD244的IgG样结构域更换为针对多发性骨髓瘤标志物BCMA的特异性抗体后得到的重组蛋白。所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。本发明的技术方案对于具有多发性骨髓瘤标志物BCMA的肿瘤的治疗具有积极效果，可以用于具有多发性骨髓瘤标志物BCMA的肿瘤(如多发性骨髓瘤)的治疗。本发明具有重大的应用价值。
多发性骨髓瘤融合蛋白标志物肿瘤特异性抗体氨基酸序表面激活细胞制备重组蛋白结构域制备治疗应用

[发明专利]一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法及其培养基-CN201910140579.4在审
发明人：顾雨春;尹乐 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2019-02-26 - 公布日： 2019-05-21 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法。本发明所提供的从造血干细胞分化产生NK细胞的方法包括如下步骤：(a)将造血干细胞接种于NK分化培养基I(NK分化基础培养基+SCF、IL3、IL7、IL15和Flt3‑L)中，进行培养；(b)7天后，采用NK分化培养基II进行半量换液，继续培养；之后每隔5‑7天使用所述NK分化培养基II(NK分化基础培养基+SCF、IL15、IL7和Flt3‑L)进行半量换液，直至培养获得造血干细胞来源的NK细胞。实验证明，本发明方法可以成功从造血干细胞分化产生NK细胞。本发明对于获得高纯度特定基因修饰的NK细胞以及工业化生产具有重要意义。
造血干细胞分化分化培养基基础培养基造血干细胞半量换液分化基因修饰重要意义高纯度接种成功

[发明专利]一种靶标间皮素的CAR-NK细胞制备方法-CN201910097663.2在审
发明人：顾雨春;尹乐 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2019-01-31 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶标间皮素的CAR‑NK细胞制备方法。该方法包括如下步骤：使NK细胞表达融合蛋白，得到靶标间皮素的CAR‑NK细胞；所述融合蛋白为将NK细胞表面激活受体CD244的IgG样结构域更换为间皮素的特异性抗体后得到的重组蛋白。所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。本发明的技术方案对于间皮素过量表达的肿瘤的治疗具有积极效果，可以用于间皮素过量表达的肿瘤，如卵巢癌和胰腺癌的独立治疗或联合治疗。本发明具有重大的应用价值。
融合蛋白靶标过量表达肿瘤胰腺癌特异性抗体氨基酸序表面激活联合治疗细胞制备重组蛋白结构域卵巢癌制备治疗应用

[发明专利]一种iCAR-T细胞的制备方法-CN201811229487.5在审
发明人：顾雨春;尹乐;吴理达;张会远;谭声江 -专利权人： 北京呈诺医学科技有限公司
申请日： 2018-10-22 - 公布日： 2019-01-18 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明涉及基因领域，特别涉及一种iCAR‑T细胞的制备方法。一种iCAR‑T细胞的制备方法，CAR‑T的DNA序列插入到iPS细胞的AAVS1位点，得到的CAR‑iPS细胞分化获得iCAR‑T细胞。本发明制备的iCAR‑T细胞由CAR‑iPS分化获得，iPS细胞可增殖周期长，更便于进行基因修饰。相对于慢病毒感染获得的iCAR‑T细胞，CAR‑iPS分化获得的iCAR‑T纯度更高，可以接近于100％；基因插入位点均为AAVS1位点，插入位置明确，安全性更高；由于iPS可近乎无限增殖，因此由CAR‑iPS获得的iCAR‑T也可近乎无限获得，不受外周血分离影响。
制备位点分化慢病毒感染插入位置基因插入基因领域基因修饰无限增殖增殖周期外周血细胞

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