[发明专利]转谷氨酰胺酶的制备方法

权利要求书

1.具有酶活性的转谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于将变性状态的转谷氨酰胺酶付诸至少包含下述工序(a)和(b)的工序：

(a)将该变性状态的酶形成中间结构的工序，所述的中间结构是形成在水性溶剂中、酸性条件下具有酶活性的结构的中间结构；以及

(b)将已经形成可形成上述结构的中间结构的酶形成高级结构的工序，所述的高级结构是在水性溶剂中、pH值中性范围内具有酶活性的高级结构。

2.权利要求1的方法，其中工序(a)中在该酶分子内半胱氨酸残基的巯基是游离的，在形成在水性溶剂中，酸性条件下具有酶活性的结构的中间结构时，在溶解状态下将该酶在酸性条件下稀释。

3.权利要求1的方法，其中工序(b)中的水性溶剂包含形成具有酶活性的高级结构的促进剂。

4.权利要求1的方法，在工序(b)之后包含工序(c)，即会合该酶中无活性的酶，作为凝集物进行分离的工序。

5.权利要求1的方法，其中工序(a)中，将该酶溶解到水性溶剂中，其中工序(b)中的中性范围是指将工序(a)中得到的酶溶液的pH值上升到中性范围。

6.权利要求2的方法，其中工序(a)中将变性状态的酶的酸性溶液稀释成酸性时，在15℃以下的低温下进行稀释，所稀释的蛋白质浓度不到10mg/ml。

7.权利要求1的方法，其中工序(a)中的水性溶剂包含蛋白质变性剂。

8.权利要求1的方法，其中形成所述结构的中间结构在近紫外区域的CD谱相对于天然状态的有30-70％的分子椭圆率。

9.具有酶活性的转谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于，将变性状态的转谷氨酰胺酶在水性溶剂中酸性条件下溶解，其后将该酶溶液调整到中性范围，生成具有酶活性的酶。

10.通过将变性状态的转谷氨酰胺酶置于水性溶剂中酸性条件下，可得到具有以下(d)-(g)所示特征的蛋白质：

(d)用异羟肟酸方法对转谷氨酰胺酶进行活性测定，它具有15-25U/mg的比活性；

(e)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法中，分子为36000-40000；

(f)近紫外区域的CD谱相对于天然状态的有30-70％的分子椭圆率；以及

(g)用His-Mes、pH6.1的缓冲液系统进行非不变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移比天然状态的慢。