[发明专利]检测样品中基因毒性化合物的诊断系统和方法

权利要求书

1.一种诊断系统，包括：

--一种接触环境胁迫物质便可增加报道基因活性的转化微生物，所述微生物含应激可诱导型启动子序列，启动子序列与编码报道基因的核酸序列有效连接，该核酸序列编码一种产生可供检测的信号的报道分子，以及

--一种含组成型和非应激诱导型启动子序列的转化微生物，启动子序列与编码报道基因的核酸序列有效连接，该核酸序列编码一种产生可供检测的信号的报道分子。

2.根据权利要求1的系统，其中的信号以光产生和/或比色改变来测定。

3.根据权利要求1或2的系统，其中转化的生物发光微生物是大肠杆菌。

4.根据权利要求1或2的系统，其中转化的生物发光微生物是鼠伤寒沙门氏菌，优选地为适用于埃姆斯测验法的微生物，它有利地选自TA98、TA100、TA102、TA104、TA1535、TA1538、TA7001到TA7006和TA7041到TA7046，和/或保藏号为LMG P-18318的微生物。

5.根据前面的权利要求1-4中任一项的系统，其中的应激可诱导型启动子序列选自groEL、dnaK、grpE、phoA、glnA、lon、lysU、rpoD、clpB、clpP、uspA、katG、uvrA、frdA、micF、fabA、lac、his、sodA、sodB、Soi-28、recA、xthA、narG、recF、recJ、recN、recO、recQ、ruv、uvrD、ars、cad、mer、pco和sfiA。

6.根据前面权利要求1到5项中任一项的系统，其中组成型和非应激诱导型启动子序列是一段具有Sigma 70共有序列(TTGACA(-35)---17/18bp---TATAAT(-10)的序列，且其转录不受启动子水平的正负调控。

7.根据前面要求1到6项中任一项的系统，其中编码报道基因的核酸序列包含萤光素酶A和B基因或LuxAB翻译融合基因。

8.根据前面权利要求1到7项中任一项的系统，其中编码报道基因的核酸序列包含萤光素酶A和B基因，以及萤光素酶C、D和E基因，这些基因是产生用于循环的有限脂肪酸底物所必需的。

9.根据前面权利要求1到8项中任一项的系统，其中环境胁迫物质是存在于样品中的基因毒性和/或毒性化合物。

10.诊断试剂盒，其包含根据前面1到9项中任一项诊断系统中的各种元件，以及可能的话，还有所需的附加反应剂、稀释剂和/或固体支持物。

11.诊断环境胁迫物质的方法，优选地用于检测样品中基因毒性和/或毒性化合物的存在，包含的步骤：

-将根据前面1-8项中任一项的诊断系统与环境胁迫物质接触，且

-测量所述诊断系统中转化的生物发光微生物的信号。

12.用于测定样品中化合物的基因毒性动力学的方法，其中在多个时间点，优选为连续地测定诱导型和组成型的两种转化微生物发出的光，此外，进行测定此时间点转化微生物的信噪比(S/N)的步骤，以诱导型微生物的S/N比除以组成型微生物的S/N比，然后将这些数据绘图，所述图代表样品中基因毒性化合物的经校正的基因毒性动力学。

13.环境胁迫物质的分析方法，包括步骤：

-按权利要求11所述进行环境胁迫物质的诊断，

-计算两种转化微生物的信噪比，

-如果计算出的信噪比至少有一个低于0.8，将此环境胁迫物质归类为有毒的，

-如果含应激诱导型启动子序列的微生物之信噪比在0.8到1.2之间，则将此环境胁迫物归类为无影响，且

-如果含应激诱导型启动子序列的微生物的信噪比高于1.2，且比含组成型启动子序列的微生物之信噪比至少高50％时，将此环境胁迫物归类为具有诱导性和基因毒性。

14.检测样品中化合物是否具有基因毒性和/或毒性的设备，包括可由样品诱导的如权利要求1到9中任一项的诊断系统；还包括带有检测装置(2)的检测系统，其可以测定来自所述诊断系统中的信号，所述检测系统与计算机(1)相连，该计算机经编程按照前面权利要求11到13中任一项的方法进行分析。