[发明专利]EpothiloneC、D、E和F,其制备方法,以及作为细胞抑制剂和植物保护剂的应用

说明书

本发明涉及epothilone C、D、E和F，其制备方法，以及在制备治疗性组合物和用于植物保护之组合物中的应用。Epothilone C和D

根据一个实施方案，本发明涉及Epothilone(C和D)，它们是如下得到的：

(a)在吸附树脂存在下以本领域已知的方式培养Sorangiumcellulosum DSM 6773，

(b)从培养物中取出吸附树脂，并用水/甲醇混合物洗涤，

(c)用甲醇淋洗经洗涤的吸附树脂，然后浓缩洗脱液，得到粗提物，

(d)用乙酸乙酯提取上述得到的浓缩物，浓缩提取物，并在甲醇和己烷之间分配，

(e)浓缩甲醇相，得到残液，该浓缩物在Sephadex柱上进行分步提取，

(f)得到包含所用微生物之代谢产物的提取部分，

(g)在C18反相柱上用甲醇/水混合物对上述得到的部分进行色谱分离，并顺序得到：

-包含Epothilone A的第一部分，

-包含Epothilone B的第二部分，

-包含第一种其它Epothilone的第三部分，

-包含第二种其它Epothilone的第四部分；

然后分离

(h1)上述第三部分中的第一种其它Epothilone；和

(h2)上述第四部分中的第二种其它Epothilone。

本发明还涉及经验式为C₂₆H₃₉NO₅S的Epothilone(C)，其特征在于具有如表1所示的¹H-和¹³C-NMR光谱。

本发明还涉及以下式的Epothilone C：Epothilone C:R=H。

本发明还涉及经验式为C₂₇H₄₁NO₅S的Epothilone(D)，其特征在于具有如表1所示的¹H-和¹³C-NMR光谱。

本发明还涉及以下式的Epothilone D：Epothilone D:R=CH₃。

Epothilone C和D可用于制备下式1的化合物，其衍生化过程可参考WO-A-97/19086中描述的衍生法。在上式1中：

R=H,C_1-4-烷基；

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵=H,C_1-6-烷基，C_1-6-酰基苄氧基，C_1-4-三烷基甲硅烷基，苄基，苯基，C_1-6-烷氧基，C₆-烷基-、羟基-和卤素-取代的苄基或苯基；

R¹-R⁵基团中的两个也可合并形成基团-(CH₂)_n-(其中n=1-6)，基团中包含的烷基或酰基是直链或支链基团；

Y和Z可相同或不同，分别是氢，卤素，如F、Cl、Br或I，假卤素，如-NCO、-NCS、或-N₃,OH,O-(C_1-6)-酰基，O-(C_1-6)-烷基，O-苄氧基；Y和Z也可是环氧化物中的O原子，但不要求保护epothilone A和B，或者形成C=C双键中的一个C-C键。

因此，12,13-双键可选择性地进行

-氢化，例如经催化或用二亚胺，所得到的式1化合物中Y=Z=H；或者

-环氧化，例如用二甲基二环氧乙烷或过酸，得到的式1化合物中Y与Z=-O-，或者

-转化为二卤化物、二假卤化物或二叠氮化物，得到的式1化合物中Y和Z=卤素、假卤素或N₃。EpothiloneE和F

根据另一个实施方案，本发明涉及Epothilone A的生物转化体，该生物转化体是如下得到的：

(a)在吸附树脂存在下按本领域已知的方式培养Sorangiumcellulosum DSM 6773，取出吸附树脂，如果需要，用Epothilone A的甲醇溶液处理全部或部分经分离的培养物；