[发明专利]新型大肠杆菌菌株及其制备方法和它们在L－苏氨酸生产发酵方法中的应用

权利要求书

1、一种用于产生L-苏氨酸的方法，包括下列步骤：

(a)在培养基中培养大肠杆菌菌株，以及

(b)回收由所述大肠杆菌产生的L-苏氨酸；其中所述大肠杆菌：

(ⅰ)在染色体上含有至少一种苏氨酸(thr)操纵子，它与至少一种非自身启动子可操纵地相连；以及

(ⅱ)不需要任何含有一种或多种编码一种或多种苏氨酸生物合成酶基因的重组质粒用于产生苏氨酸。

2、权利要求1的方法，其中所述大肠杆菌能够在大约30小时内产生至少约50g/L的L-苏氨酸。

3、权利要求1的方法，其中所述非自身启动子选自tac启动子、lac启动子、trp启动子、lpp启动子、P_L启动子和P_R启动子。

4、权利要求1的方法，其中所述的苏氨酸操纵子含有一种编码抗反馈的天冬氨酸激酶-高丝氨酸脱氢酶的基因。

5、根据权利要求1的方法，其中所述的大肠杆菌为菌株kat-13。

6、根据权利要求3的方法，其中所述的非自身启动子为tac启动子。

7、根据权利要求1的方法，其中所述的大肠杆菌在染色体上含有一种缺陷型苏氨酸脱氢酶基因。

8、权利要求1的方法，其中所述的苏氨酸操纵子获自ATCC 21277。

9、权利要求1的方法，其中所述的大肠杆菌为疏螺旋体素抗性。

10、一种制备大肠杆菌氨基酸产生菌株的方法，该菌株不带有编码一种或多种该氨基酸生物合成酶基因的重组质粒，该方法包括以下步骤：

(a)将遗传物质从一种氨基酸产生菌引入到一种大肠杆菌菌株的染色体中；

(b)将非自身启动子在氨基酸生物合成基因的染色体位置之前插入到所述染色体中，并与该生物合成基因可操纵地相连以控制其表达；以及

(c)选择性地从所述染色体上去除氨基酸生物合成的调控障碍和/或营养需求。

11、一种微生物大肠杆菌的菌株，具有下列特征：

(ⅰ)它的染色体含有至少一种苏氨酸(thr)操纵子，其与至少一种非自身启动子可操纵地相连，以及

(ⅱ)不需要任何含有一种或多种编码一种或多种苏氨酸生物合成酶基因的重组质粒用于产生苏氨酸。

12、权利要求11的菌株，其中所述的苏氨酸操纵子含有一种抗反馈的天冬氨酸激酶Ⅰ-高丝氨酸脱氢酶Ⅰ基因(thrA)、一种高丝氨酸激酶(thrB)基因、一种苏氨酸合酶基因(thrC)。

13、权利要求11的菌株，其中所述的大肠杆菌为菌株kat-13。

14、根据权利要求11的菌株，其中所述的非自身启动子为tac启动子。

15、权利要求11的菌株，其中所述的大肠杆菌在染色体上含有一种缺陷型苏氨酸脱氢酶基因。

16、权利要求11的菌株，其中所述的苏氨酸操纵子来自ATCC 21277。

17、权利要求11的菌株，其中所述的大肠杆菌为疏螺旋体素抗性。

18、权利要求11的菌株，其中所述的大肠杆菌具有菌株NRRL B-21593的特征。

19、一种产生L-苏氨酸的方法，它包括以下步骤：

(a)在培养基中培养疏螺旋体素抗性的大肠杆菌菌株，以及

(b)回收由该大肠杆菌产生的L-苏氨酸。

20、权利要求19的方法，其中所述的大肠杆菌能够在大约30小时内产生至少约50g/L的L-苏氨酸。

21、权利要求19的方法，其中所述的大肠杆菌含有至少一种苏氨酸(thr)操纵子，其与至少一种非自身启动子可操纵地相连。

22、权利要求21的方法，其中所述的苏氨酸操纵子含有一种编码抗反馈的天冬氨酸激酶-高丝氨酸脱氢酶的基因。

23、根据权利要求19的方法，其中所述的大肠杆菌为菌株kat-13。

24、根据权利要求21的方法，其中所述的非自身启动子为tac启动子。