[发明专利]HLA－A2.1结合肽及其用途

说明书

本专利申请是USSN 60/013,980的部分继续，后者又与USSN08/589,108、USSN 08/454,033，以及USSN 08/349,177有关，并且在如下专利中，相继地前者是后者的部分继续：USSN 60/013,980、USSN08/159,184、USSN 08/073,205、USSN 08/027,146。本申请还与USSN08/205,713有关。上面所有的专利申请在此都被引入作为参考。

                      发明背景

本发明涉及用于对许多病理状态如病毒性疾病和癌症进行预防、治疗或诊断的组合物和方法。特别是提供了能结合于所选择的主要组织相容性复合物(MHC)分子并诱发免疫反应的新型肽。

MHC分子被分类为Ⅰ类分子或Ⅱ类分子。Ⅱ类MHC分子主要是在与启动和维持免疫反应有关的细胞上表达，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。Ⅱ类分子可被辅助T淋巴细胞识别，诱导辅助T淋巴细胞增殖并放大对特定的免疫原性肽所展示的免疫反应。Ⅰ类MHC分子可在几乎所有的有核细胞上表达，被细胞毒T淋巴细胞(CTLs)识别，然后破坏携带抗原的细胞。CTLs在肿瘤排斥和抗病毒感染过程中特别重要。

CTL能识别结合于MHCⅠ类分子的以肽片段形式存在的抗原，而不是完整的外来抗原本身。在正常情况下抗原必须被细胞内源性地合成，并在细胞质中，部分蛋白质抗原被裂解成小肽片段。某些这种小肽位移进入前Golgi区，并与Ⅰ类分子重链相互作用，以便于适当地折叠并与β₂微球蛋白的亚单位结合。然后，这种肽-MHCⅠ类复合物被转移到细胞表面，便于表现并可以被特别的CTLs识别。

对人MHCⅠ类分子，HLA-A2.1的晶体结构研究表明，通过Ⅰ类分子重链α₁和α₂结构域的折叠，形成了一个肽结合槽(Bjokman等，Nature 329:506(1987))。但是，在这些研究中，对结合于此槽内肽的种类并未确定。

Buus等，Science 242:1065(1988)首先描述了一种从MHC上酸洗脱结合肽的方法。随后，Rammensee及其合作者(Falk等，Nature351:290(1991))建立了一种方法，用于鉴定天然产生的结合于Ⅰ类分子的肽。其它一些研究者借助于质谱分析法，通过对从B型Ⅰ类分子(Jardetzky等，Nature 353:326(1991))和从A2.1型Ⅰ类分子中洗脱的肽进行常规的自动测序，已成功地达到了对各种HPLC组分中较大量的肽进行直接氨基酸测序的目的(Hunt等，Science 225:1261(1992))。Rotzschke和Falk已提供了有关对MHCⅠ类分子中天然产生的结合肽鉴定的述评(Rotzschke和Falk,Immunol.Today 12:447(1991))。

Sette等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:3296(1989)的研究表明，MHC等位基因特异性基元可用于预测MHC结合能力。Schaeffer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:4649(1989)的研究表明，MHC结合与免疫原性有关，几位研究者(De Bruijn等，Eur.,J.Immunol.21:2963-2970(1991)；Pamer等，Nature 353:852-955(1991))已提供了初步证据表明，Ⅰ类分子结合基元可用于对动物模型鉴定潜在的免疫原性肽。还必须对那些对许多已知Ⅰ类同种型分子的人等位基因具有特异性的Ⅰ类分子基元进行阐述。理想的情况是，这些不同等位基因的聚合频度应该足够高，以便能包括大部分，或者大多数异系繁殖人群。

尽管技术在发展，但是，现有的技术还必须在此研究的基础上提供有用的基于人肽的疫苗或治疗药剂。本发明提供了这种肽，并具有其它一些优点。

                      发明概述

本发明提供具有HLA-A2.1分子结合基元的免疫原性肽。这种免疫原性肽结合合适的MHC等位基因，优选长度为9-10个残基，并含有在特定位置，如第2位和第9位，的保守残基。并且所述肽不含有本文定义的负结合残基，所述负结合残基如9氨基酸肽时的第1、3、6位和/或第7位，10氨基酸时的第1、3、4、5、7、8位和/或第9位。本发明在基元内限定位置可以选择有效与HLA A2.1结合的肽。