[发明专利]用重组生物体生产1,3－丙二醇的方法

权利要求书

1.由重组生物体生产1，3-丙二醇的方法，包括：

(i)用转化盒转化合适宿主生物体，所述转化盒含有至少一种以下基因：

    (a)编码甘油-3-磷酸脱氢酶活性的基因；

    (b)编码甘油-3-磷酸酶活性的基因；

    (c)编码脱水酶活性的基因；

    (d)编码1，3-丙二醇氧化还原酶活性的基因；条件是假如所述转化盒包含少于(a)-(d)的全部4个基因，那么所述合适宿主生物体含有内源性基因，由此产生的转化宿主生物体含有(a)-(d)基因每种至少一个；

(ii)在存在至少一种选自单糖、寡糖、多糖或一碳底物的碳源的情况下，于合适条件培养所述转化宿主生物体，由此生产1，3-丙二醇；以及

(iii)回收1，3-丙二醇。

2.权利要求1的方法，其中所述转化盒包含(a)-(d)所有基因。

3.权利要求1的方法，其中所述合适宿主生物体选自细菌、酵母和丝状真菌。

4.权利要求3的方法，其中所述合适宿主生物体选自柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、梭菌属、克雷伯氏菌属、气杆菌属、乳杆菌属、曲霉属、酵母属、裂殖酵母属、接合酵母属、毕赤酵母属、克鲁维酵母属、念珠菌属、汉逊酵母、德巴利酵母属、毛霉属、球拟酵母属、甲基酵母属、埃希氏菌属、沙门氏菌属、芽孢杆菌属、链霉菌属和假单胞菌属。

5.权利要求4的方法，其中所述合适宿主生物体选自大肠杆菌、克雷伯氏菌属菌种(Klebsiella spp.)和酵母属菌种(Saccharomycesspp.)。

6.权利要求1的方法，其中所述转化宿主生物体是用包含dhaB1、dhaB2、dhaB3和dhaT基因的转化盒转化的酵母属菌种(Saccharomycesspp.)，其中所述基因稳定地整合入所述酵母属菌种基因组。

7.权利要求1的方法，其中所述转化宿主生物体是用包含GPD1和GPD2基因的转化盒转化的克雷伯氏菌属菌种(Klebsiella spp.)。

8.权利要求1的方法，其中所述碳源是萄萄糖。

9.权利要求1的方法，其中所述编码甘油-3-磷酸脱氢酶的基因选自相应于SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的基因，所述氨基酸序列包含不引起所述甘油-3-磷酸脱氢酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

10.权利要求1的方法，其中所述编码甘油-3-磷酸酶的基因选自相应于SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：17所示氨基酸序列的基因，所述氨基酸序列包含不引起所述甘油-3-磷酸酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

11.权利要求1的方法，其中所述编码甘油激酶的基因相应于SEQID NO：18所示氨基酸序列，所述氨基酸序列包含不引起所述甘油激酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

12.权利要求1的方法，其中所述编码脱氢酶的基因包括dhaB1、dhaB2和dhaB3，所述基因分别对应于SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含不引起所述脱氢酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

13.权利要求1的方法，其中所述编码1，3-丙二醇氧化还原酶的基因对应于SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含不引起所述1，3-丙二醇氧化还原酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

14.转化的宿主细胞，包含：

(a)一组基因，包括

    (1)编码相应于SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的甘油-3-磷

酸脱氢酶的基因；

    (2)编码相应于SEQ ID NO：17所示氨基酸序列的甘油-3-磷

酸酶的基因；

    (3)编码相应于SEQ ID NO：34所示氨基酸序列的甘油脱水酶

α亚基的基因；

    (4)编码相应于SEQ ID NO：35所示氨基酸序列的甘油脱水酶

β亚基位的基因；

    (5)编码相应于SEQ ID NO：36所示氨基酸序列的甘油脱水酶

γ亚基的基因；以及

    (6)编码相应于SEQ ID NO：37所示氨基酸序列的1，3-丙二醇

氧化还原酶的基因，(a)(1)-(6)的各个氨基酸序列包含不引起基因(1)-(6)的酶的功能改变的氨基酸取代、缺失或加入，以及

(b)用(a)的一组基因转化宿主细胞，由此转化的宿主细胞利用选自单糖、寡糖和多糖或一碳底物的至少一种底物生产1，3-丙二醇。