[发明专利]人尿激酶原的生产

说明书

本发明涉及生产非糖基化单链尿激酶原（以下简称proUK）的重组DNA方法，特别是涉及生产非糖基化尿激酶原的方法，该方法包括从已建立的细胞系中提取mRNA，基于所说的mRNA制备cDNA，将cDNA插入载体内，再将所得质粒导入细菌细胞中，从而产生转化株并由所说的细菌细胞中回收非糖基化的proUK。本发明还涉及用于上述方法的某些表达质粒。

由于对调节生理血纤维蛋白溶解作用之分子间相互影响的认识逐渐加深，已导致了在了解血凝块溶解机制和开发新的血栓溶解剂方面的重要进展。

在人血纤维蛋白溶解系统中，酶原即血纤维蛋白溶酶原可被几种类型的血纤维蛋白溶酶原激活剂活化成活性酶，即血纤维蛋白溶酶（Collen，D.and        Lijnen，H.R.，CRC        Critical        Reviews        in        oncology/hematology，4，n.3，P.249，1986;Verstraete，M.and        Collen，D.：Blood，67，n.6，P.1529，1986）。血纤维蛋白溶酶是负责降解血凝块中血纤维蛋白成分的主要蛋白酶（Rakoczi，I.，Wiman，B.and        Collen，D.：Biochim.Biophys.Acta，540，P.295，1978;Robbins，K.C.，Summaria，L.，Hsieh，B.;and        Shah，R.S.：J.Biol.Chem.242，P.2333，1967;Wiman，B.;Eur.J.Biochem.76，P.129，1977）。

然而，血纤维蛋白也可对参予凝血途径的几种血浆蛋白，即血纤维蛋白原、因子Ⅴ和Ⅷ发挥其蛋白水解作用（Collen，D.and        Lijnen，H.R.，CRC        Critical        Reviews        in        oncology/hematology，4，n.3，P.249，1986;Verstraete，M.and        Collen，D.：Blood，67，n.6，P.1529，1986;Wiman，B.，Lijnen，H.R.and        Collen，D.;Biochim.Biophys.Acta，579，P.142，1979）。

血纤维蛋白溶酶原的活化可在全身水平上发生，导致循环血纤维蛋白溶酶迅速被α₂抗血纤维蛋白溶酶中和，从而不能用于血纤维蛋白溶解作用（Collen，D.and Lijnen，H.R.，CRC Critical Reviews in oncology/hematology，4，n.3，P.249，1986;Verstraete，M.and Collen，D.：Blood，67，n.6，P.1529，1986）。

当α₂抗血纤维蛋白溶酶水平明显降低时，血纤维蛋白溶酶被中和的迅速减慢。且不只对血纤维蛋白，还对如前所述的血凝蛋白产生其蛋白溶解作用。

血浆中血纤维蛋白原、因子Ⅴ和Ⅷ的浓度过度降低，加上血纤维蛋白原对止血过程、血小板聚集及血纤维蛋白聚合产生的抑制作用将导致止血缺陷，进而造成出血的危险（Latallo，Z.S.and        Lopaciuk，S.;Thrombos.Diath.Haemouh.，56，P.253，1973;Totty，W.G.，Gilula，L.A.，Mc.Clennman，M.，Ahmed，P.，and        Sherman，L.，Radiology，143，P.59，1982）。另一方面，血纤维蛋白溶酶原的活化可在血纤维蛋白水平上发生（即血纤维蛋白结合的血纤维蛋白溶酶原活化），形成与血纤维蛋白结合的血纤维蛋白溶酶（Collen，D.and Lijnen，H.R.，CRC Critical Reviews in oncology/hematology，4，n.3，P.249，1986;Verstraete，M.and Collen，D.：Blood，67，n.6，P.1529，1986），从而不受α₂抗纤维蛋白溶酶的影响，且不能诱发全身性血纤维蛋白原溶解作用。