[其他]标记蛋白质的放射性卤化小分子

说明书

本发明涉及标记蛋白质，尤其是抗体的放射性囟化小分子，用于临床诊断和治疗，以及涉及把高比活放射性卤素引进蛋白质分子。

放射性卤化蛋白质是广泛的科学研究的课题，并有可能作为在试管内和体内的各种各样的临床应用。例如，放射性碘标记的铁蛋白用在试管中诊断测定血清内铁蛋白浓度。放射性碘标记的甲状腺刺激激素应用于类似的测定。

卤素的放射性核素具有的一些特性，使它们对诊断图象和放射性治疗很有吸引力。例如，放射性碘中，碘-123（半衰期＝13小时，159千电子伏γ，电子俘获）对于用现时的γ照相机摄象几乎是理想的，碘-131（半衰期＝8天，364千电子伏γ，β粒子）在产生较低射线透度的图象时，已证明在甲状腺的临床放射性治疗中是有用的。同样地，溴放射性核素中例如溴-75（半衰期＝1.6小时，阳电子）和溴-76（半衰期＝16小时，阳电子）具有一些特性，使它们对阳电子X线体层照相法摄象具有吸引力，溴-77（半衰期＝2.4天，一些γ，电子俘获）具有一些特性，使它对放射性治疗具有吸引力。其它放射性囟素，如氟-18（半衰期＝110分钟，阳电子）和砹-211（半衰期＝7.2小时，α电子）对于放射性摄象及放射性治疗也是具有吸引力的选择物。

集中在癌组织的单克隆抗体的生长，由于这些抗体对肿瘤细胞表面抗原的高度专一性和亲和力，增加了放射性标记抗体对诊断和/或治疗的临床应用的希望。抗体的高度专一性使它们成为理想的选择物，作为载体分子加上有效的放射性核素，把放射性传送到癌部位。

遗憾的是，目前还没有常规的用于体内的放射性卤素标记抗体的临床诊断或治疗应用。业已证明抗体和其它蛋白质的直接放射性卤素标记是困难的。抗体对放射性标记反应条件显示出不同的敏感性，以及放射性卤化作用所必要的氧化反应条件是特别有害的。蛋白质的直接放射性碘化作用已成常规，但常常发生蛋白质生物活性的适度还原，附加的放射性标记的稳定性也会变化。例如，已发现抗体的放射性碘损失，对于某些标记抗体，在24小时内竟高达50%。放射性溴化比放射性碘化需要更强的氧化反应条件，如果得到作为氧化剂的酶并不贵和不难，则试图直接放性溴化蛋白质正已略有成效。此外，蛋白质的直接放射性卤化基本上发生在酪氨酰残余物，酪氨酸的活化酚环增加了邻位取代放射性卤素标记生成物的内在电子不稳定性，放射性卤素标记也蒙受空间位阻影响，并且还得到脱碘酶，该脱碘酶分解结构上类似的甲状腺激素，例如甲状腺素。

为直接放射性卤化所需要的防止发生蛋白质受到苛刻反应条件的一种方法是使用小分子，该小分子可以在分离反应器中被放射性标记，随后在适度的反应条件下连接到蛋白质。这种方法是市场上可买到的鲍尔顿-亨特试剂，N-琥珀酰亚胺基-3-（4-羟苯基）丙酸酯的依据，因此，用放射性碘得到适度的放射性标记产品（35～60%标记蛋白质的产量），但是放射性碘标记的稳定性遇到上述化学上类似的放射性碘化酪氨酰残余物的相同问题。同样地，市场上可买到的伍德试剂、（甲基-4-羟基苯甲亚胺酸盐（hydroxy    benzimidate），在接合到蛋白质之前可以放射性碘化。然而，放射性碘化产品也受邻-碘化酚的内在不稳定性影响，即使这些试剂不产生所要求的稳定放射性标记，固为蛋白质的少量减话化起固于它们的应用，故这些诚剂已广泛用作放射性碘化。

为把高比活性放射性碘引入这些分子，需要话化芳环，固此酚环用于鲍尔顿-亨特和伍德试剂。最理想的是能够把放射性囟素引入小分子，该小分子含有不同于酚的芳环，以致更稳定地接合放射性标记。此外，如果羟基不存在，放射性标记就较少受到电子和空间位阻的影响。

文献中最近报导叙述了他机金属中间体的用途，把高比活性放射性卤素引入简单有机分子的非活化芳环，而不引入较复杂的有机分子，这些分子可以连接到蛋白质上，并无上述缺点。

本发明提供一种快速而有效的方法，即在保存蛋白质生物活性的条件下，把高比活性卤素放射性核素引入接合到蛋白质的小分子的非活化芳环。放射性卤素在非活化芳环上的取代，提供了一种比现有技术在活化芳环如酚上的取代具有更稳定的放射性标记蛋白质。此外，为了使放射性标记较少受脱碘酶反应，可以在不含羟基官能度的芳环上对位或间位取代放射性卤素。