[发明专利]分析微卫星不稳定性的标志物、方法和引物探针组合物

权利要求书

1.一组用于分析微卫星不稳定性的标志物，其特征在于，包含如下MS1~MS8中的至少1、2、3、4、5、6、7或8个标志物：

MS1：包含10个连续A的同聚物重复，其定位在人基因SULF2并起始于chr20：47657577；

MS2：包含9个连续T的同聚物重复，其定位在人SEC31A基因并起始于chr4：82864412；

MS3：包含10个连续A的同聚物重复，其定位在人TGFBR2基因并起始于chr3：30650380；

MS4：包含12个连续A的同聚物重复，其定位在人EIF4E3基因并起始于chr3：71690181；

MS5：包含8个连续A的同聚物重复，其定位在人ACVR2A基因并起始于chr2：147926117；

MS6：包含12个连续A的同聚物重复，其定位在人TAOK3基因并起始于chr12：118238179；

MS7：包含11个连续A的同聚物重复，其定位在人DIDO1基因并起始于chr20：62905340；

MS8：包含12个连续T的同聚物重复，其定位在人UBAC2基因并起始于chr13：99238595。

2.用于检测权利要求1所述标志物的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物基于荧光PCR熔解曲线分析检测所述标志物，包含分别用于扩增各标志物的引物对和用于提供荧光信号的探针，所述引物对扩增各标志物的同聚物重复或其突变形式的区域；所述探针为分子信标探针，所述探针的两端分别标记有荧光基团和淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，各引物对中包括限制性引物和过量引物，过量引物的数量大于限制性引物的数量，所述限制性引物与所述探针具有相同的方向，过量引物产生的单链模板与所述分子信标探针进行互补配对。

4.根据权利要求3所述的引物探针组合物，其特征在于，限制性引物与过量引物的摩尔比例为1:5~15。

5.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，探针的Tm值不低于扩增步骤中的退火温度。

6. 根据权利要求2~5任一项所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物中引物的核苷酸序列选自SEQ ID NO.1~16中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16条；和/或，探针的核苷酸序列选自SEQ ID NO.19~26中的至少1、2、3、4、5、6、7或8条。

7. 根据权利要求6所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括用于检测内参基因的引物对和探针，所述引物探针组合物中引物的核苷酸序列选自SEQ ID NO.1~18；探针的核苷酸序列选自SEQ ID NO.19~27。

8.用于检测权利要求1所述标志物的试剂盒，其特征在于，包括检测权利要求1所述标志物的检测试剂。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，包括（B1）或（B2）：

（B1）权利要求2~7中任一项所述的用于扩增各标志物的引物对中的至少一对；

（B2）权利要求2~7任一项所述的引物探针组合物；

和，（C1）~（C3）中的至少一种：

（C1）荧光熔解曲线法所使用的试剂；

（C2）PCR buffer、盐、酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP、阴性对照、阳性对照和荧光染料中的一种或多种；

（C3）阴性对照和/或阳性对照。

10.权利要求1所述的用于分析微卫星不稳定性的标志物，或权利要求2~7任一项所述的引物探针组合物，或权利要求8或9所述的试剂盒的在以下任意一项中的应用：

（ⅰ）分析微卫星不稳定性；

（ⅱ）制备用于分析微卫星不稳定性状态的产品；

（ⅲ）制备癌症检测产品。