[发明专利]一种用于检测四种蔬菜病毒的RT-PCR试剂盒及应用

说明书

本发明涉及一种用于检测四种蔬菜病毒的RT‑PCR试剂盒及应用，属于植物病毒检测技术领域。所述RT‑PCR试剂盒中包含独立包装或正向引物、反向引物分别混装，所述的四对引物分别为：ZYMV‑D‑F、ZYMV‑D‑R；TuMV‑D‑F、TuMV‑D‑；BBWV‑2‑D‑F、BBWV‑2‑D‑R；CMV‑D‑F、CMV‑D‑R。本发明可判断待测植株是否感染这四种病毒，操作简便易行，一份样品只需一次PCR即可对四种病毒进行检测，减少了操作次数，避免了交叉感染，同时还减少了试剂、引物、模板、及耗材等的使用量，节约了时间，达到了简便、经济、快速和准确的检测要求，可以用于蔬菜病毒的快速筛查等。

技术领域

本发明涉及一种用于检测四种蔬菜病毒的RT-PCR试剂盒及应用，属于植物病毒检测技术领域。

背景技术

2011年以来，蔬菜产量和产值均超过粮食作物。蔬菜种植规模的扩大，以及大棚种植的发展，使病毒病的发生逐渐增多，蔬菜病毒病逐渐成为蔬菜生产的第一大病害，病毒病每年对蔬菜产业造成巨大损失。

植物病毒病已成为制约我国植物产业稳定发展的重要病害。通过对主要病毒性植物病害应用绿色防治技术，农药使用量可减少50%，消除田间杂草和有毒植物残留，培育无毒幼苗，控制害虫等方式可以有效控制植物病毒病（史晓斌等, 2020）。蔬菜病毒病的田间识别特征主要为:叶片有明脉、花叶、坏死斑点等症状；果实上出现坏死斑点；植株出现矮化畸形（易图永, 2015）。

目前，我国种植的蔬菜品种很多。在2019年由中国农业科学院牵头完成的蔬菜病毒调查中，茄科、葫芦科、十字花科和豆科蔬菜共检出病毒63种。全国蔬菜病毒普查显示，黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）、烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，TMV）、马铃薯Y病毒（potato virus Y，PVY）、马铃薯S病毒（potato virus S，PVS）、蚕豆萎蔫病毒（broad bean wiltvirus-2，BBWV-2）、芜菁花叶病毒（trunip mosaic virus，TuMV）等病毒的寄主范围很广，能够侵染包括茄科、葫芦科、豆科、十字花科等科蔬菜。其中BBWV-2、TuMV、CMV、TMV为检出率较高的优势病毒，并且以上4种病毒在全国各地几乎均有检出。ZYMV病毒检出率也相对较高，但其地域分布不及BBWV-2、TuMV、CMV、TMV等4种病毒广泛（刘勇等,2019）。在所有蔬菜作物中，CMV已超过TMV成为主要优势病毒，全国检出率最高，在多种植物中检出率最高，其次是TMV、TuMV和BBWV-2等多种病毒（刘勇等, 2019）。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了一种用于检测四种蔬菜病毒的RT-PCR试剂盒及应用。本发明的试剂盒可以实现同时检测黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）、蚕豆萎蔫病毒（broadbean wilt virus-2，BBWV-2）、芜菁花叶病毒（trunip mosaic virus，TuMV）、小西葫芦黄化花叶病毒（zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）这四种侵染蔬菜的病毒，本发明提供了一种新的、同时鉴别多种蔬菜病毒的快速检测手段。本发明的技术方案如下：

一种用于检测四种蔬菜病毒的RT-PCR试剂盒，所述RT-PCR试剂盒包含四对引物：

ZYMV-D-F，如SEQ ID NO.1所示；

ZYMV-D-R，如SEQ ID NO.2所示；

TuMV-D-F，如SEQ ID NO.3所示；

TuMV-D-R，如SEQ ID NO.4所示；

BBWV-2-D-F，如SEQ ID NO.5所示；

BBWV-2-D-R，如SEQ ID NO.6所示；

CMV-D-F，如SEQ ID NO.7所示；

CMV-D-R， 如SEQ ID NO.8所示；

所述四种蔬菜病毒分别为ZYMV、TuMV、BBWV-2和CMV。