[发明专利]检测mRNA样品加帽率的探针、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于测定mRNA加帽率受RNase H酶特异性切割的探针，其特征在于，所述探针设计形式为，RNA片段0-50nt+DNA片段1-10nt+RNA片段0-50nt，对DNA片段上的一个或多个碱基进行硒取代；所述硒取代是指脱氧核酸上磷酸根中的氧原子被硒原子取代；

所述探针与待测mRNA的5’端的特异区段反向互补；所述探针的DNA片段上未被硒代的部分受RNase H快切酶特异性切割。

2.如权利要求1所述的一种用于测定mRNA加帽率受RNase H酶特异性切割的探针，其特征在于，所述探针设计形式优选为，RNA片段0-50nt+DNA片段2-10nt+RNA片段0-50nt。

3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸分析专用流动相、核酸分析专用系统冲洗液和权利要求1所述的探针，所述试剂盒用于检测mRNA加帽率；

所述核酸分析专用流动相和核酸分析专用系统冲洗液由全氟三乙胺与苯为原料配制。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括以下组分：RNase H快切酶、无核酶buffer套装、高负载SA磁珠、无核酶低吸附耗材套装和超高效寡核苷酸分离专用色谱柱。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述无核酶buffer套装包括溶液1：RNaseH reaction buffer；溶液2：0.1 M NaCl；溶液3：5 mM Tris-HCl，0.5 mM EDTA，60 mMNaCl，pH 7.5；溶液4：100 μΜ EDTA。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述无核酶低吸附耗材套装包括无核酶低吸附EP管，无核酶低吸附枪头和无核酶低吸附样品瓶。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测mRNA加帽率的方法包括以下步骤：

S1：使用无核酶低吸附枪头将待测的mRNA与探针以及溶液1混合在无核酶低吸附EP管中，按照退火程序退火；

S2：使用无核酶低吸附枪头将高负载SA磁珠移取至无核酶低吸附EP管中，使用溶液2清洗磁珠；

S3：使用无核酶低吸附枪头将退火后溶液同清洗后的磁珠混合，37 ℃孵育30 min；

S4：使用无核酶低吸附枪头移取RNase H快切酶至S3溶液中，37 ℃孵育3 h，酶解与磁珠相连的杂交双链；

S5：使用溶液3清洗S4中的磁珠；

S6：使用无核酶低吸附枪头移取溶液4与S5中的磁珠相混合，80 ℃孵育3 min，转移至磁力架上吸附，快速吸取上清液转移至无核酶低吸附样品瓶内；

S7：使用核酸分析专用系统冲洗液冲洗液质系统；

S8：将S6得到的mRNA片段利用核酸分析专用流动相通过超高效寡核苷酸分离专用色谱柱进行液质分析；

S9：对获得的色谱质谱图进行分析，计算加帽率。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，mRNA与所述探针的配比为1:10-10:1的范围。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述高负载SA磁珠为30-3000 nm粒径四氧化三铁磁珠，包覆链霉亲和素。