[发明专利]一种阿克曼氏菌分离培养基以及从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种阿克曼氏菌分离培养基以及从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法。本发明提供的阿克曼氏菌分离培养基以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素。采用本发明提供的培养基对粪便样品中阿克曼氏菌的分离具有极大的促进作用，能够更有效地排除杂菌对阿克曼氏菌株分离的影响，相较于原始分离方法，分离效率明显更高，分离获得阿克曼氏菌的成功率显著提高。本发明的培养基还具有组成简单、成本低的优势，分离方法简单易行，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种阿克曼氏菌分离培养基以及从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法。

背景技术

阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）作为一种常见的肠道厌氧菌，距离2004年首次成功分离至今已有十余年。然而，目前只有非常有限的阿克曼氏菌菌株被成功分离和培养，可能原因是阿克曼氏菌对氧气的敏感性和易受杂菌生长影响的微小菌落形态。近年来宏基因组学和高通量等新型测序技术极大地丰富了微生物的检测手段。虽然组学有望帮助人们深入了解肠道菌群的菌落结构，但为了更好地利用有益微生物，有必要对更多的阿克曼氏菌菌株进行分离纯化，因此，需要开发高效的阿克曼氏菌分离培养基和分离方法。

发明内容

本发明提供一种阿克曼氏菌分离培养基以及从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法。

粪便样品中的微生物菌群复杂多样，阿克曼氏菌因其对营养要求较为严格，生长较慢，菌落微小，导致粪便中很多微生物均会对其分离筛选造成干扰，进而造成阿克曼氏菌的分离失败或分离效率降低。本发明在针对粪便样品分离阿克曼氏菌的研究中意外地发现，通过在分离筛选过程中添加万古霉素和红霉素，两种抗生素联用既能够有效抑制粪便样品中其他微生物的生长，同时还不会对阿克曼氏菌的生长产生抑制作用，进而显著提高了阿克曼氏菌的分离效率。

具体地，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供万古霉素和红霉素在从粪便样品中分离阿克曼氏菌中的应用。

具体地，所述应用为：以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素用于粪便样品的富集培养和/或阿克曼氏菌的分离培养；

其中，万古霉素的添加浓度为4-6μg/mL，红霉素的添加浓度为0.3-0.5μg/mL。

本发明发现，在上述浓度下将红霉素与万古霉素联用，即可显著抑制杂菌的生长，同时又不会对阿克曼氏菌的生长产生抑制。

优选地，上述应用包括：以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素用于粪便样品的富集培养和阿克曼氏菌的分离培养，在富集培养和分离培养使用的培养基中，万古霉素的添加浓度为4-6μg/mL，红霉素的添加浓度为0.3-0.5μg/mL。

进一步优选地，上述应用包括：将粪便样品置于含有万古霉素4-6μg/mL、红霉素0.3-0.5μg/mL的富集培养用培养基中进行富集培养，得到样品富集液；对样品富集液进行初步筛选鉴定，将鉴定含有阿克曼氏菌的样品富集液在含有万古霉素4-6μg/mL、红霉素0.3-0.5μg/mL的分离培养用培养基中进行分离培养，对分离得到的菌株进行阿克曼氏菌的鉴定。

第二方面，本发明提供一种阿克曼氏菌分离培养基，所述培养基以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素。

优选地，所述培养基中，万古霉素的浓度为4-6μg/mL，红霉素的浓度为0.3-0.5μg/mL。

具体地，所述阿克曼氏菌分离培养基包含：

第一培养基，为液体培养基，用于粪便样品的富集培养，包含：碳源和氮源、无机盐、氨基酸、益生元和筛选抗生素；其中，所述碳源和氮源包含脑心浸粉15-20g/L，黏蛋白2-4g/L，蛋白胨5-15 g/L，葡萄糖1-3 g/L；

第二培养基，为固体培养基，用于阿克曼氏菌的分离培养，包含：碳源和氮源、无机盐、氨基酸和筛选抗生素；其中，所述碳源和氮源包含黏蛋白2-4 g/L。