[发明专利]一种阿克曼氏菌分离培养基以及从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法

权利要求书

1.万古霉素和红霉素在从粪便样品中分离阿克曼氏菌中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为：以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素用于粪便样品的富集培养和/或阿克曼氏菌的分离培养；

其中，万古霉素的添加浓度为4-6μg/mL，红霉素的添加浓度为0.3-0.5μg/mL。

3.一种阿克曼氏菌分离培养基，其特征在于，所述培养基以万古霉素和红霉素作为筛选抗生素。

4.根据权利要求3所述的阿克曼氏菌分离培养基，其特征在于，所述培养基中，万古霉素的浓度为4-6μg/mL，红霉素的浓度为0.3-0.5μg/mL。

5.根据权利要求4所述的阿克曼氏菌分离培养基，其特征在于，所述培养基包含：

第一培养基，为液体培养基，用于粪便样品的富集培养，包含：碳源和氮源、无机盐、氨基酸、益生元和筛选抗生素；其中，所述碳源和氮源包含脑心浸粉15-20g/L，黏蛋白2-4g/L，蛋白胨5-15 g/L，葡萄糖1-3 g/L；

第二培养基，为固体培养基，用于阿克曼氏菌的分离培养，包含：碳源和氮源、无机盐、氨基酸和筛选抗生素；其中，所述碳源和氮源包含黏蛋白2-4 g/L。

6.根据权利要求5所述的阿克曼氏菌分离培养基，其特征在于，所述第一培养基中，无机盐包含氯化钠、磷酸氢二钠和微量元素，氨基酸包含L-半胱氨酸或其盐，益生元包含菊粉；

和/或，所述第二培养基中，无机盐包含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化铵、氯化镁、氯化钙、碳酸氢钠和微量元素，氨基酸包含L-半胱氨酸或其盐。

7.根据权利要求5或6所述的阿克曼氏菌分离培养基，其特征在于，所述第一培养基包含以下组分：蛋白胨8-12g/L，牛脑浸粉 10-15g/L，牛心浸粉4-8g/L，氯化钠 3-7g/L，葡萄糖1-3g/L，磷酸氢二钠 2-3g/L，黏蛋白2-4g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.3-0.8 g/L，菊粉15-25g/L，Coolaber 1000×B6微量元素溶液 0.8-1.2mL/L，万古霉素4-6μg/mL，红霉素0.3-0.5μg/mL；

和/或，所述第二培养基包含以下组分：磷酸二氢钾 0.3-0.5 g/L，磷酸氢二钠 0.5-0.6g/L，氯化钠 0.2-0.4 g/L，氯化铵 0.2-0.4 g/L，氯化镁 0.05-0.2g/L，氯化钙 0.1-0.2g/L，碳酸氢钠3-5 g/L，L-半胱氨酸盐酸盐 0.4-0.6g/L，黏蛋白2-4g/L，Coolaber 1000×B6微量元素溶液 0.8-1.2mL/L，万古霉素4-6μg/mL，红霉素0.3-0.5μg/mL。

8.权利要求3~7任一项所述的阿克曼氏菌分离培养基在从粪便样品中分离阿克曼氏菌中的应用。

9.一种从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法，其特征在于，所述方法包括：将粪便样品置于权利要求3~7任一项所述的阿克曼氏菌分离培养基中的第一培养基中进行富集培养得到样品富集液；对样品富集液进行初步筛选鉴定，将鉴定含有阿克曼氏菌的样品富集液在权利要求3~7任一项所述的阿克曼氏菌分离培养基中的第二培养基中进行分离培养，对分离得到的菌株进行阿克曼氏菌的鉴定。

10.根据权利要求9所述的从粪便样品中分离阿克曼氏菌的方法，其特征在于，所述初步筛选鉴定为以样品富集液的DNA为模板，以阿克曼氏菌特异性引物进行PCR扩增，根据扩增产物判断样品富集液中是否含有阿克曼氏菌；

所述阿克曼氏菌特异性引物为上游引物AKKF-1和下游引物AKKR-2，其中，上游引物AKKF-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物AKKR-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。