[发明专利]一种活菌计数稀释液及活菌计数方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种活菌计数稀释液及活菌计数方法。所述活菌计数稀释液包括pH5.6‑6.4的柠檬酸盐缓冲液，还可以包括表面活性剂、L‑半胱氨酸盐酸盐、蛋白胨中的至少一种。使用本发明以柠檬酸盐缓冲液为基底的缓冲液体系作为稀释液，所得菌液的活菌计数结果均高于以生理盐水为稀释液的活菌计数结果，亦高于以磷酸盐缓冲液、Mitsuoka's缓冲液作为稀释液的活菌计数结果，说明柠檬酸盐缓冲液体系可以提高同等条件的活菌计数的数量结果，能最大程度上保证活菌计数的准确性，保持菌种的活性，减少细菌在活菌计数的操作过程中的死亡率，更加真实的反映出菌液中的活菌数目。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种活菌计数稀释液及活菌计数方法。

背景技术

在微生物领域，不管是微生物的增菌培养还是发酵生产的菌粉检测，抑或是活菌制剂的相关检查，都不可避免的需要检查供试品中活菌的数目，则此过程中活菌计数方法的准确性就至关重要。影响活菌计数结果准确性因素除却人为因素一般就是稀释液的选择和计数用培养基的选择，培养基的筛选可根据菌种的不同可分为厌氧培养基、有氧培养基以及其他针对不同种属生长特性的培养基，但稀释液的筛选除却生理盐水、PBS外，寥寥无几，且生理盐水、PBS选择性不强，针对不同种属的菌种间结果表现差异大，对活菌计数结果准确性参差不一。故针对这些问题，本发明对比了几种缓冲液，选用了一种新的稀释液缓冲体系，针对需氧、厌氧、兼性厌氧细菌均有很强的保护作用，可在同等条件下提高活菌计数的结果，保证活菌计数的准确性。

发明内容

本发明的目的是解决上述现有技术的不足，提供一种活菌计数稀释液及活菌计数方法。能够更好的保持菌种的活性，减少细菌在活菌计数的操作过程中的死亡率，更加真实的反映出菌液中的活菌数目。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种活菌计数稀释液，包括pH5.6-6.4的柠檬酸盐缓冲液。

优选地，所述活菌计数稀释液还包括表面活性剂、L-半胱氨酸盐酸盐、蛋白胨中的至少一种。

更进一步的，所述表面活性剂为非离子表面活性剂；优选吐温20、吐温80或TritonX-100。

优选地，所述表面活性剂的浓度为0.3-1g/L。

优选地，所述L-半胱氨酸盐酸盐的浓度为0.3-1g/L。

优选地，所述蛋白胨的浓度为0.5-2g/L。

活菌计数稀释液中所述活菌为需氧菌、厌氧菌或兼性厌氧菌。

优选地，所述活菌为金黄色葡萄球菌、两歧双歧杆菌、短乳杆菌、植物乳杆菌或肠球菌。

本发明还保护一种利用上述稀释液的活菌计数方法，包括以下步骤：

S1、稀释液制备：配制上述的稀释液，121℃灭菌15-30min后备用；

S2、供试液制备：无菌称取菌粉或菌体，用稀释液10倍稀释，混匀，作为10^-1供试液备用；

S3、梯度稀释供试液制备：取10^-1供试液加入精密量取的稀释液中，逐步梯度稀释，选择至少三个合适的梯度作为梯度稀释供试液备用；

S4、涂布：取x μL梯度稀释供试液，用无菌涂布棒均匀涂布于固体培养基表面，避开平皿边缘涂布，并同法操作稀释液作为空白对照；

S5、培养：全部涂布完成后，倒置于25-42℃下培养24-48h，观察并记数菌落生长情况；

S6、计数：取生长区间在10～300之间的菌落进行计数，若平板上生长的菌落有粘连的情况，则按照两个菌落进行计数，全部计数完成后，计算平均菌落数，计算公式如下：

注：活菌数用“CFU”表示，即为细菌集落单位；x为涂布体积（μL）。

本发明的有益效果在于：