[发明专利]一种活菌计数稀释液及活菌计数方法

权利要求书

1.一种活菌计数稀释液，其特征在于：包括pH5.6-6.4的柠檬酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的稀释液，其特征在于：还包括表面活性剂、L-半胱氨酸盐酸盐、蛋白胨中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的稀释液，其特征在于：所述表面活性剂为非离子表面活性剂。

4.根据权利要求2或3所述的稀释液，其特征在于：所述表面活性剂为吐温20、吐温80或Triton X-100。

5.根据权利要求2所述的稀释液，其特征在于：所述表面活性剂的浓度为0.3-1g/L。

6.根据权利要求2所述的稀释液，其特征在于：所述L-半胱氨酸盐酸盐的浓度为0.3-1g/L。

7.根据权利要求2所述的稀释液，其特征在于：所述蛋白胨的浓度为0.5-2g/L。

8.根据权利要求1所述的稀释液，其特征在于：所述活菌为需氧菌、厌氧菌或兼性厌氧菌。

9.根据权利要求8所述的稀释液，其特征在于：所述活菌为金黄色葡萄球菌、两歧双歧杆菌、短乳杆菌、植物乳杆菌或肠球菌。

10.一种利用权利要求1-9任一项所述的稀释液的活菌计数方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、稀释液制备：配制权利要求1-9任一项所述的稀释液，121℃灭菌15-30min后备用；

S2、供试液制备：无菌称取菌粉或菌体，用稀释液10倍稀释，混匀，作为10^-1供试液备用；

S3、梯度稀释供试液制备：取10^-1供试液加入精密量取的稀释液中，逐步梯度稀释，选择至少三个合适的梯度作为梯度稀释供试液备用；

S4、涂布：取x μL梯度稀释供试液，用无菌涂布棒均匀涂布于固体培养基表面，避开平皿边缘涂布，并同法操作稀释液作为空白对照；

S5、培养：全部涂布完成后，倒置于25-42℃下培养24-48h，观察并记数菌落生长情况；

S6、计数：取生长区间在10～300之间的菌落进行计数，若平板上生长的菌落有粘连的情况，则按照两个菌落进行计数，全部计数完成后，计算平均菌落数，计算公式如下：

注：活菌数用“CFU”表示，即为细菌集落单位；x为涂布体积（μL）。