[发明专利]一种通过控制糖多孢红霉菌胞内NADH水平提高红霉素产量的诱导表达系统、菌株及应用

权利要求书

1.一种通过控制糖多孢红霉菌胞内NADH水平提高红霉素产量的诱导表达系统，其特征在于，包括SACE_1905基因构建的质粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA；其中，所述SACE_1905基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的通过控制糖多孢红霉菌胞内NADH水平提高红霉素产量的诱导表达系统，其特征在于，所述SACE_1905基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的通过控制糖多孢红霉菌胞内NADH水平提高红霉素产量的诱导表达系统，其特征在于，所述质粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA的构建方法如下：

①将dCas9片段、合成DNA片段cmt插入到质粒pSET152的酶切位点，获得重组质粒pSETcd；

②将P_ermE*片段、SACE_1905基因插入到重组质粒pSETcd的酶切位点，获得重组质粒pSETcd-1905；

③扩增靶向SACE_1905的sgRNA，获得含sgRNA片段；将所述含sgRNA片段插入到重组质粒pSETcd-1905酶切位点，获得重组质粒pSETcd-1905-sgRNA；

④扩增cmt元件，并将所述cmt片段插入到重组质粒pSETcd-1905-sgRNA的酶切位点，获得目标所需的工程质粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA。

4.根据权利要求1所述的通过控制糖多孢红霉菌胞内NADH水平提高红霉素产量的诱导表达系统，其特征在于，所述质粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA用于诱导表达SACE_1905基因，并通过动态控制糖多孢红霉菌胞内还原力水平来提高红霉素产量。

5.一种红霉素高产工程菌株，其特征在于，所述菌株包括如权利要求1～4所述的诱导表达系统。

6.根据权利要求5所述的红霉素高产工程菌株，其特征在于，将所述诱导表达系统的质粒pSETcd-1905-cmt-sgRNA导入到红霉素工业菌株中，即得。

7.一种如权利要求5所述的红霉素高产工程菌株的应用，其特征在于，利用所述红霉素高产工程菌株发酵生产红霉素，并以添加诱导剂、优化诱导条件的方式动态控制基因SACE_1905的表达，平衡菌株的初级代谢生长与次级代谢，提高红霉素产量。

8.根据权利要求7所述的红霉素高产工程菌株的应用，其特征在于，所述诱导剂采用cumate；诱导条件为：在发酵96h时，添加终浓度为60μmol/L的cumate溶液。