[发明专利]毕赤酵母表达犬重组白蛋白及其纯化方法在审
| 申请号： | 202310660983.0 | 申请日： | 2023-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN116606859A | 公开（公告）日： | 2023-08-18 |
| 发明（设计）人： | 孙博;张世野;赵维昊;王泽辉 | 申请（专利权）人： | 长春天和博为生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘翠香 |
| 地址： | 130000 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母 表达 重组 白蛋白 及其 纯化 方法 | ||
1.编码犬白蛋白的核酸，其具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
2.包含权利要求1所述核酸的表达载体。
3.表达犬白蛋白的宿主菌，其特征在于，其表达如权利要求1所述的核酸。
4.根据权利要求3所述的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌包括毕赤酵母菌。
5.权利要求3或4所述宿主菌的构建方法，其特征在于，取权利要求2所述的表达载体转化感受态菌株后获得所述宿主菌。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述宿主菌经包含0.25～5mg/mLG418的YPD培养基筛选后获得。
7.犬白蛋白的制备方法，其特征在于，包括培养如下①或②所述的宿主菌，诱导所述犬白蛋白的表达：
①、权利要求3或4所述的宿主菌；
②、权利要求5或6所述制备方法制得的所述宿主菌。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述诱导的条件包括：诱导培养基为BMMY培养基，诱导温度28℃，甲醇添加量为0.5％，诱导时间72h。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述宿主菌的培养采用发酵罐培养，所述发酵罐培养步骤包括一级种子培养、二级种子培养、补料发酵培养和诱导发酵培养，所述补料发酵培养中添加的补料包括：50vol％甘油和PTM1。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，还包括取所述发酵罐培养后的发酵液进行离心获得上清液，所述上清液经柱层析获得纯化后的所述犬白蛋白。
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