[发明专利]轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用。本发明提供了轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用。本发明基于基因组重复原件Alu末端特征，融合PCR扩增平台的快速及高通量测序平台的全面特征阐述一种高效，快捷的轻量级微卫星不稳定性检测装置，用于对临床样本快速精确检测，使得更多结直肠癌患者从免疫治疗中获益。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用。

背景技术

高发病率和高死亡率使得结直肠癌成为全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，患病人数逐年攀升，半数以上的患者直接或者间接的死于结直肠癌，并且发病人群趋于年轻化，严重威胁人类生命健康及财产安全。由于癌症患者机体错配修复功能（MMR）缺陷导致短片段重复区域（微卫星区域）发生不同程度的插入（Insertions）或者缺失（Deletions）累积致使基因组微卫星不稳定（Microsatellite instability，MSI），大量针对结直肠癌的研究表明高水平的微卫星不稳定性与结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）的发生和发证有密切关联，随着癌症分子机制深入研究及免疫检查抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors，ICIs）药物的开发上市，自2017年美国FDA陆续批准了Pabolizumab（K药）和Nivolumab（O药）作为MSI-H/dMMR结直肠癌患者的后线治疗药物，2021年我国批准Envolimab用于患有泛实体瘤和结肠直肠癌的MSI-H/dMMR患者的后线治疗，相应临床研究表明对MSI-H的患者采用免疫治疗时可明显提高5年生存率，降低肿瘤的扩散和转移，这使得微卫星不稳定性成为重要且成熟的肿瘤免疫治疗生物标志物。

微卫星不稳定性在不同癌肿中均有出现，但在结直肠癌和子宫内膜癌中尤其明显，因此也出现不同平台的检测产品，目前临床主要使用的有两类，第一类时通过检PCR检测与肿瘤密切相关的微卫星位点判断MSI状态，目前国内外也有获批上市的产品；第二类则是临床常用的免疫组织化学法。随着高通量测序技术（Next Generation Sequencing，NGS）发展和临床应用，美国FDA批准F1CDx作为对MSI-H泛实体瘤中Pabrizumab (K药物)的伴随诊断，用于筛选可能受益于Pabrizumab治疗的MSI-H实体瘤患者，该方法颠覆了传统检测方法，将检测对象扩展到整个基因组而非局限性的几个位点，可通过检测少量的cfDNA评价样品微卫星不稳定性，与此同时，NGS方法可同时完成其他肿瘤标志物的检出，例如与肿瘤免疫治疗相关的组织肿瘤突变负荷（TMB）和游离核酸肿瘤突变符合（bTMB），拷贝数变异等。

虽然高通量测序技术相比荧光PCR技术具有很多扩展性功能，但检测流程冗长复杂，费用高昂，过度依赖于捕获探针及多重扩增引物而造成浪费，对待检测样本要求较高，针对低输入量，低肿瘤含量，肿瘤循环DNA样本仍然存在挑战。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用。

本发明提供了轻量级微卫星不稳定性检测装置及其应用。本发明基于基因组重复原件 Alu末端特征，融合PCR扩增平台的快速及高通量测序平台的全面特征阐述一种高效，快捷的轻量级微卫星不稳定性检测装置，用于对临床样本快速精确检测，使得更多结直肠癌患者从免疫治疗中获益。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了引物组，其包括：

（Ⅰ）、上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；和

（Ⅱ）、下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

（Ⅲ）、与（Ⅰ）或（Ⅱ）所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与（Ⅰ）或（Ⅱ）所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或