[发明专利]长林小蠹SS-COI PCR检测引物以及检测方法在审
| 申请号： | 202310650254.7 | 申请日： | 2023-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN116656835A | 公开（公告）日： | 2023-08-29 |
| 发明（设计）人： | 姚艳霞;李承锦;黄谊青;林若竹;淮稳霞;王小艺;赵文霞 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所（国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心） |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 100091 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 长林小蠹 ss coi pcr 检测 引物 以及 方法 | ||
1.长林小蠹SS-COI PCR检测引物，其特征在于，所述长林小蠹SS-COI PCR检测引物由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的下游引物组成。
2.权利要求1所述长林小蠹SS-COI PCR检测引物在制备检测长林小蠹试剂中应用。
3.长林小蠹SS-COIPCR检测试剂盒，包括：2×Flash PCR MasterMix，长林小蠹SS-COIPCR检测引物，ddH2O；其特征在于，所述长林小蠹SS-COI PCR检测引物由核苷酸序列为SEQID No.1所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的下游引物组成。
4.一种长林小蠹的SS-COIPCR检测方法，其特征在于，包括：
(1)提取待检测样品的DNA；
(2)以待检测样品的DNA为模板，以权利要求1所述长林小蠹SS-COI PCR检测上游引物和下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增反应；
(3)如果待检测样品出现474bp的扩增条带，则待检测样品为长林小蠹。
5.根据权利要求4所述SS-COI PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中所建立的PCR扩增体系包括：2×Flash PCR MasterMix12.5μL、上游引物HLSSCOIF 1μL、下游引物HLSSCOIR 1μL、基因组DNA模板1.5μL、ddH2O 9μL。
6.根据权利要求4所述SS-COI PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增反应中退火温度为54℃或55℃。
7.根据权利要求6所述SS-COI PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增反应退火温度为55℃。
8.根据权利要求4所述SS-COI PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增反应程序为：98℃预变性30s，94℃变性10s，54℃或55℃退火15s，72℃延伸15s，共34个循环，最后72℃延伸1min。
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