[发明专利]分子伴侣TF在促进A型塞内卡病毒结构蛋白VP2可溶性表达中的应用

权利要求书

1.分子伴侣蛋白Trigger factor在促进A型塞内卡病毒结构蛋白VP2表达中的应用。

2.一种可溶性表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌含有表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2的质粒和表达分子伴侣Trigger factor的质粒。

3.一种可溶性表达重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2的方法，其特征在于，所述方法包括：将同时表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2和分子伴侣蛋白Trigger factor的基因工程菌进行发酵培养，诱导表达获得重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

基因工程菌的制备：制备同时表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2和分子伴侣蛋白Trigger factor的基因工程菌；

诱导表达：将获得的基因工程菌进行发酵培养，加入L-阿拉伯糖和IPTG诱导表达获得重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌的制备包括如下步骤：

(1)对A型塞内卡病毒结构蛋白VP2基因密码子进行大肠杆菌密码子优化，合成SVA VP2基因并连接到大肠杆菌表达载体，构建重组表达质粒；

(2)将分子伴侣pTF16质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，筛选制备感受态细胞；

(3)将步骤(1)所述的重组质粒转入步骤(2)感受态细胞，筛选获得同时表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2和分子伴侣蛋白Trigger factor的基因工程菌。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌包括BL21(DE3)，BL21(DE3)pLysS，B834(DE3)，BLR(DE3)，JM109，XL1Blue，ER2566，Rosetta，GI698。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌的制备为：

(1)合成SEQ ID NO.1所示的SVA VP2基因序列并连接到大肠杆菌表达载体pET28a(+)，构建重组表达质粒pET28a-SVA-VP2；

(2)合成含有氯霉素抗性基因的分子伴侣pTF16(Cm⁺)质粒，转化至BL21(DE3)感受态细胞，利用含有氯霉素的培养基培养，挑取阳性克隆获得pTF16-BL21(DE3)感受态细胞；

(3)将步骤(1)所述的重组质粒pET-28a-SVA-VP2转入步骤(2)所述的pTF16-BL21(DE3)感受态细胞，于含卡那霉素和氯霉素的培养基上培养，挑取阳性克隆获得同时表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2和分子伴侣蛋白Trigger factor的基因工程菌。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述诱导表达为：

将同时表达A型塞内卡病毒结构蛋白VP2和分子伴侣蛋白Trigger factor的基因工程菌进行发酵培养，向培养物中加入终浓度为2g/L的L-阿拉伯糖和1mmol/L的IPTG进行诱导表达；

离心收集菌体，进行PBS重悬，重悬菌体破碎后离心取上清，纯化获得重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2。

9.根据权利要求3-8任一所述的方法制备获得的重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2。

10.如权利要求9所述的重组A型塞内卡病毒结构蛋白VP2在制备塞内卡病毒病疫苗中的应用。