[发明专利]POLE基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒

说明书

本申请属于分子检测技术领域，具体涉及一种基于多重荧光PCR结合毛细管电泳的POLE基因分型检测方法及试剂盒，具有检测灵敏度高、分辨率高、通量高且易于操作等优势。

技术领域

本申请属于分子检测技术领域，具体涉及一种POLE基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒。

背景技术

子宫内膜癌是一种发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，好发于围绝经期和绝经后女性。子宫内膜癌(EC)2020版NCCN指南依据POLE、MSI和P53三种指标，将EC分为四种具有不同预后的分子亚型，作为形态学分型的补充。2020ESGO指南推荐所有的EC患者进行分子分型，其中POLE突变型与G3内膜样癌相关，预后最好，且I～II期POLE超突变型EC可以不用考虑任何其他因素，省略辅助化疗，2021中国《子宫内膜癌诊断与治疗指南》亦推荐了POLE基因分型检测。

POLE突变临床检测需求强烈，但缺乏中国人群数据及热点突变位点频率，需建立一套完整的POLE检测解决方案。结合CE平台多重荧光PCR技术优势，建立准确度高、成本低、操作简便和大规模的检测体系，可准确检测热点突变，用于临床初步筛查。

有鉴于此，提出本申请。

发明内容

本申请的目的是寻求一种通量高、特异性强、灵敏度高、成本低且操作简单的POLE基因突变检测的复合扩增体系及其方法。为实现上述目的，本申请提供如下技术方案。

本申请首先提供一种检测POLE基因分型的引物组合物，该引物组合物在同一PCR体系中能同时对12个POLE突变进行多重扩增；

进一步的，所述引物组合物对POLE基因外显子上SNP位点进行扩增；优选的，所述外显子包括9号外显子、11号外显子、13号外显子和14号外显子。

更进一步的，所述SNP包括如下：

9号外显子：c.857CG(P286R)、c.884TG(M295R)、c.890CT(S297F)；

11号外显子：c.1100TC(F367S)、c.1102GT(D368Y)；

13号外显子：c.1231GT(V411L)、c.1270CA(L424I)、c.1270CG(L424V)、c.1307CG(P436R)、c.1331TA(M444K)；

14号外显子：c.1366GC(A456P)、c.1376CT(S459F)。

进一步的，所述引物包括如下特异性引物和荧光引物序列：

P286R位点：

正向突变型引物：

反向共用引物：5’-ACTAACAGTGGGGCAGATGCTG-3’；

M295R位点：

正向突变型引物：5’-GATGCTGAGACAGACCAGATTAGGAG-3’，

反向共用引物：5’-ACTAACAGTGGGGCAGATGCTG-3’；

S297F位点：

正向突变型引物：

反向共用引物：5’-ATACTAACAGTGGGGCAGATGCTG-3’；

F367S位点：

正向突变型引物：5’-GTCACCTACAACGGGGACTGTTC-3’，

反向共用引物：5’-GCAACGCCCTCCCTCTCAAAT-3’；