[发明专利]同时检测四种鱼类病毒的重组酶聚合酶可视化扩增试纸条

说明书

本发明属于病毒检测技术领域，具体为一种同时检测四种鱼类病毒的重组酶聚合酶可视化扩增试纸条。本发明提供了同时检测四种鱼类病毒的RPA引物和探针，基于述RPA引物和探针建立的RPA扩增试纸及检测方法可以特异性、高灵敏度的同时检测四种鱼类病毒。本发明的试纸型检测方法操作快速简便、适用面广、成本低，符合水生动物疫病检测技术的发展方向；该方法操作简单且读取结果更为方便快捷，摆脱了对仪器的依赖，特异性良好，灵敏度也完全符合要求，甚至比RT‑PCR更高，特别适合我国基层养殖场使用，对未来大范围水生动物疫病监测工作有重要意义。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体为一种同时检测四种鱼类病毒的重组酶聚合酶可视化扩增试纸条。

背景技术

核酸扩增技术，包括PCR技术与恒温核酸扩增技术是目前病原体检测最灵敏的方法。近年来，PCR技术已成为临床检验的主流技术，但由于对仪器、实验室及实验人员要求高，一直局限于中心实验室内，无法为社区、学校、部队门诊等基层卫生部门服务，更无法应用于农村、野外等资源匮乏地区。

恒温核酸扩增技术是近年来新兴的分子诊断技术，可实现恒温下核酸快速扩增，无需昂贵精密的仪器，其中以环介导恒温扩增技术(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)应用最为广泛，它能在65℃恒温条件下进行核酸扩增，且加入核酸染料后能实现结果可视化，但缺点是引物设计复杂，仍需特异的加热设备，并且核酸染料对扩增有抑制作用，会导致检测灵敏度降低和稳定性差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中存在的临床检验局限性大、引物设计复杂、需要特异加热设备等问题，提供一种同时检测四种鱼类病毒的重组酶聚合酶可视化扩增试纸条。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：本发明提供一种同时检测四种鱼类病毒的RPA引物和探针，包括：

SVCV RPA引物F：5’-TCTGGATGGATCTGCCATGCAGCTGAA-3’；

SVCV RPA引物R：5’-GACTGATGAAGATCTGGGGTTTCCCC-3’；

SVCV检测探针：5’-TCGGATGAATACTGTGGG-3’；

IHNV RPA引物F：5’-ACATCAAGGGGGGAGTCCTCGAGGAT-3’；

IHNV RPA引物R：5’-GCGAAGGTAGCGTCTGGTGGTGCC’；

IHNV检测探针：5’-TCTCGTTCCCTCTCCTCC-3’；

EHNV RPA引物F：5’-CAGCACAGTCAGGGACATGGTCGTGGAGC-3’；

EHNV RPA引物R：5’-GACGGGAGTGGCGCAGGTGTAATTGGAG-3’；

EHNV检测探针：5’-GGTTGACCATGTGGACTGG-3’；

VHSV RPA引物F：5’-GACGAGGCAAGCAAGGATCACGAGTA-3’；

VHSV RPA引物R：5’-TCTATGAAATCAGGGTTGAGAAATTTC-3’；

VHSV检测探针：5’-TCATCCAGATGCAGGA-3’。

还提供一种利用所述的RPA引物和探针进行RNA扩增试纸的制备：

S1：获取待测病毒的DNA；