[发明专利]一种基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V及其编码基因和应用在审
| 申请号： | 202310449149.7 | 申请日： | 2023-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN116497008A | 公开（公告）日： | 2023-07-28 |
| 发明（设计）人： | 曹雪;晏姗;张丽欢;于明;游顶云;张会香;石岚兰;王利梅 | 申请（专利权）人： | 昆明医科大学 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C12N15/70;C12N15/57;C12N1/21;A61K38/48;A61P17/02;A61P29/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 昆明科众知识产权代理事务所(普通合伙) 53218 | 代理人： | 方金敏 |
| 地址： | 650500 云南省昆*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基质 金属 蛋白酶 突变体 mmp8 p326v 及其 编码 基因 应用 | ||
1.一种重组蛋白基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V，其特征在于，所述基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V是将SEQ ID NO.1所示的基质金属蛋白酶8MMP8第326位的Pro突变为Val。
2.根据权利要求1所述的基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V，其特征在于，所述基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示的蛋白质。
3.如权利要求1或2所述的基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.包含权利要求3所述的编码基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体为将权利要求3所述的编码基因连接到pLenti-C-mGFP-P2A-Puro的SgfI和MluI酶切位点之间，且保持pLenti-C-mGFP-P2A-Puro的其他序列不变得到的重组载体pLenti-C-mGFP-P2A-Puro-MMP8-P326V。
5.包含利要求4所述的重组载体的重组菌。
6.权利要求1或2所述的基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)针对权利要求1或2所述的基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V的突变位点设计携带突变位点的引物，以含有野生型基质金属蛋白酶8MMP8的编码基因的质粒为模板，进行定点突变PCR，获得含有基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V的编码基因的重组载体；
(2)重组载体转化宿主细胞，得到重组菌；所述重组菌的宿主细胞为大肠杆菌HB101感受态细胞；所述重组蛋白的宿主细胞为293T；
(3)培养重组菌，诱导表达蛋白；
(4)回收并纯化，即得基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V。
7.如权利要求6所述的基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V的重组蛋白制备方法，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
8.如权利要求1或2所述重组蛋白基质金属蛋白酶8突变体MMP8-P326V在制备促进皮肤伤口愈合产品和抑制MMP8引起的胶原纤维过度沉积和过度炎症等皮肤愈合负性事件的产品上的应用。
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