[发明专利]一种前列腺癌类器官的培养基体系及培养方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种前列腺癌类器官的培养基体系及培养方法。该培养基体系包括成球培养基和分化培养基；成球培养基包括Advanced DMEM/F12基础培养基、B27、L‑谷氨酰胺、R‑Spondin‑1重组蛋白、Noggin蛋白、FGF basic、FGF‑10、EGF、ROCK抑制剂Y‑27632、A83‑01、p38MAPK抑制剂SB202190、烟酰胺、肝细胞生长因子；还包括Wnt 3a细胞因子、硫酸酯酶2重组蛋白；分化培养基包括成球培养基和分化培养添加剂；分化培养基添加剂包括氯化锌和亚精胺。该培养基体系中的Wnt‑3a和SULF2能提高前列腺癌类器官的增殖、侵袭迁移、以及抗凋亡能力；氯化锌和亚精胺可更好的保留肿瘤异质性；该培养方法具有更高的细胞增殖速度和细胞活率，得到的前列腺癌类器官的质量更优。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种前列腺癌类器官的培养基体系及培养方法。

背景技术

目前的前列腺癌培养基更多的是通过加入FBS血清的方式进行培养，对类器官的代谢组学影响较大。

上述培养方式引入了动物源性成分，也易造成药敏测试的假阳性结果。此外，对前列腺癌组织样本的原代细胞提取和类器官培养方法，目前是空缺的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种前列腺癌类器官的培养基体系及培养方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供一种前列腺癌类器官的培养基体系，所述培养基体系包括成球培养基和分化培养基；

所述成球培养基包括Advanced DMEM/F12基础培养基、B27、L-谷氨酰胺、R-Spondin-1重组蛋白、Noggin蛋白、FGF basic、FGF-10、EGF、ROCK抑制剂Y-27632、A83-01、p38MAPK抑制剂SB202190、烟酰胺、肝细胞生长因子；还包括Wnt 3a细胞因子、硫酸酯酶2重组蛋白；

所述分化培养基包括所述成球培养基和分化培养添加剂；所述分化培养基添加剂包括氯化锌和亚精胺。

进一步，所述成球培养基和所述分化培养基中均还包括双氢睾酮和PGE2。

进一步，所述成球培养基和所述分化培养基中均还包括pH缓冲液、抗菌剂和抗氧化剂；所述pH缓冲液为HEPES，所述抗菌剂为Primocin抗生素，所述氧化剂为N-乙酰半胱氨酸。

进一步，所述成球培养基中，HEPES的浓度为5-10mM、B27的浓度为1×、L-谷氨酰胺的浓度为1×、R-Spondin-1重组蛋白的浓度为100-200ng/ml、Noggin蛋白的浓度为50-100ng/ml、FGF basic的浓度为1-2ng/ml、FGF-10的浓度为10-20ng/ml、EGF的浓度为50-100ng/ml、ROCK抑制剂Y-27632的浓度为10-20μM、A83-01的浓度为0.5-2μM、双氢睾酮的浓度为1-2nM、Primocin抗生素的浓度为50-100μg/ml、p38MAPK抑制剂SB202190的浓度为10-20μM、烟酰胺的浓度为10-20mM、N-乙酰半胱氨酸的浓度为1-2mM、PGE2的浓度为1-2μM、Wnt3a细胞因子的浓度为10-20

ng/ml、肝细胞生长因子的浓度为50-100ng/ml、硫酸酯酶2重组蛋白的浓度为5-10ng/ml；溶剂为Advanced DMEM/F12基础培养基。