[发明专利]一种基因检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物诊断技术领域，具体涉及一种基因检测试剂盒及其应用。本发明公开了检测FPAX5的表达水平在制备诊断猫淋巴瘤的产品中的应用以及相关的检测试剂盒。本发明的试剂盒能够作为猫淋巴瘤诊断的手段之一，具有检测快速方便、检测灵敏度高、特异度好、成本低，可以满足大多数的检测需求。

技术领域

本发明属于生物诊断技术领域，具体涉及一种基因检测试剂盒及其应用。

背景技术

淋巴瘤(Lymphoma)是一种恶性肿瘤，起源于淋巴细胞及其前体细胞。猫肿瘤病中约50％是血液系统肿瘤。血液系统肿瘤中50％以上是淋巴瘤。

淋巴瘤是人或动物常见的肿瘤，至今无法解释其发生的原因。在有些猫，猫白血病病毒(FeLV)可能诱发此病。随着更多的猫接受免疫或者室内饲养，降低了猫白血病毒(FeLV)感染的风险，病毒本身也变得不常见。环境因素，例如吸烟能够增加罹患LSA的危险，其他环境因素尚待研究。猫淋巴瘤未见品种和性别倾向。

临床症状根据感染部位不同而有所区别。猫常见三种淋巴瘤类型：泛发多中心型、纵膈型、消化道(胃肠道)型。泛发型淋巴结(淋巴腺)肿大可能是多中心型唯一的临床症状。纵膈型发生于前胸腔且可能导致呼吸困难。消化道型能够累及胃或者肠道的任何部分，导致体重丢失、嗜睡、食欲不振、呕吐和腹泻等。体格检查可能能触诊到腹部肿块。有些猫可见肿大的肝脏和脾脏等。

如果浅表淋巴结都出现肿大，那么淋巴瘤较容易诊断，如果肿瘤存在于不易观察的器官，诊断断将变得困难。常用诊断方法如下：(1)血常规：若淋巴瘤侵及骨髓并导致骨髓抑制，会出现血细胞计数下降、血红蛋白下降等贫血表现。(2)FeLV/FIV检查：FeLV阳性和FIV阳性可以支持淋巴瘤的诊断，但阳性并不代表淋巴瘤确诊，阴性也不能排除淋巴瘤。(3)生化及尿液检查：侵及肾脏可表现为高氮质血症、尿比重下降。侵及肝脏可表现出肝酶升高。(4)超声探查：患腹腔内淋巴瘤的猫，常会发现肝脏增大、脾脏增大、肝脏或脾脏回声改变(混合型回声或多处低回声区)、肠壁增厚等异常表现。(5)细针穿刺：通过此方法可以从细胞或组织病理学的方面为确诊提供证据。实施细针穿刺活检的风险和花费较活组织检查要小。通常采样的器官和组织包括肝脏、脾脏、纵膈、肾脏和淋巴结。(6)小肠活检：通过腹部探查或内窥镜的方式取样，但需要结合患猫的身体状况判断是否适宜麻醉及手术。

上述这些诊断方法成本较高，人员要求高，且对猫的损伤较大。因此，急需开发一种常规检测猫淋巴瘤的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题一是筛选合适可用于猫淋巴瘤诊断的标志物；二是在此基础上，开发一种用于检测猫淋巴瘤的试剂或试剂盒。

因此，一方面，本发明提供了一种猫淋巴瘤诊断标志物，所述的标志物为FPAX5。

再一方面，本发明还提供了一种猫淋巴瘤诊断试剂盒，所述试剂盒包括检测FPAX5表达水平的试剂。

优选地，本发明所述的检测FPAX5表达水平的试剂包括检测FPAX5基因表达水平的试剂和/或检测FPAX5蛋白表达水平的试剂。

优选地，本发明所述的检测FPAX5基因表达水平的试剂包括特异性扩增FPAX5和内参β-actin的引物。

优选地，本发明所述的特异性扩增FPAX5和内参β-actin的引物如下所示：

FPAX5-F：5’-cggacatcttcaccaccaca-3’；

FPAX5-R：5’-ctcccggaaaactcactccc-3’；

β-actin-F：5’-cactgtgcccatctacgagg-3’；

β-actin-R：5’-tcttctccagggaggacgag-3’。