[发明专利]布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物及应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体公开了布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物，包括hsa‑miR‑11400、hsa‑miR‑199a‑5p或hsa‑miR‑148a‑5p中的一种或两种以上；hsa‑miR‑11400的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，hsa‑miR‑199a‑5p的核苷酸序列为SEQ ID NO:5，hsa‑miR‑148a‑5p的核苷酸序列为SEQ ID NO:7。本发明还公开了上述用于检测上述布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物的试剂在制备检测试剂盒中的应用，以及用于检测布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物的试剂在制备检测试剂盒中的应用。本发明公开的在布鲁氏菌病中具有诊断潜力，为布鲁氏菌病提供潜在的诊断生物标志物。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物及应用。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis，简称“布病”)是由布鲁氏菌属细菌侵入机体，引起人畜共患的传染性变态反应性疾病，多因接触患病的牛、羊等牲畜及其制品感染，发病隐匿、诊断延迟和致残率高，对患者的健康尤其危险，不具有典型的临床症状并易形成慢性感染性疾病。目前已经有12种布鲁氏菌被报道，其中引起人类感染的最常见的布鲁氏菌包括羊种、牛种和猪种，其中羊种布鲁氏菌毒力最强。

随着畜牧业的迅速发展，我国牲畜饲养量逐渐增加，畜牧产品的流通速度加快，使布鲁氏菌病扩散速度增快，流行范围也不断扩大，布鲁氏菌病感染已成为我国重要的公共卫生问题之一。

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类约为22个核苷酸大小的非编码单链RNA，对多种生物功能具有重要的调节作用，可作为疾病的分期、分级、疾病预测以及临床干预措施监测等生物标志物。目前，布鲁氏菌病患者的精确临床诊断面临着许多挑战。血清miRNAs的表达水平往往与机体状态存在密切关系，miRNAs有望成为布鲁氏菌病精确诊断和预后判断的良好标志物。近年来，国内外研究学者已发表了许多有关miRNAs作为生物标志的研究报道。但是相比于在肿瘤中已知的重要作用，miRNAs在感染性疾病尤其是细菌感染所致疾病中的作用研究还较少。

发明内容

本发明的目的在于提供布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物及应用，以解决上述技术问题。

本发明的目的之一在于提供布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物，包括hsa-miR-11400、hsa-miR-199a-5p或hsa-miR-148a-5p中的一种或两种以上；hsa-miR-11400的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，hsa-miR-199a-5p的核苷酸序列为SEQ ID NO:5，hsa-miR-148a-5p的核苷酸序列为SEQ ID NO:7。

本发明目的之二在于提供上述用于检测上述布鲁氏菌病的外泌体miRNA标志物的试剂在制备检测试剂盒中的应用。

本发明的有益效果：本发明提供的外泌体hsa-miR-11400、hsa-miR-199a-5p和hsa-miR-148a-5p具有布鲁氏菌病诊断潜力，可以作为布鲁氏菌病精确诊断和预后判断的生物标志物。

附图说明

图1为血清外泌体的鉴定；A：血清来源外泌体中标记蛋白CD9和TSG101的蛋白质印迹；B：使用Zetasizer纳米zs90粒度仪测量的外泌体直径；C：从血清中纯化的外泌体的电子显微照片(比例尺500nm)；

图2为差异表达的血清外泌体miRNA的热图；

图3为布鲁氏菌病患者中五种外泌体miRNA的相对表达；A：hsa-miR-194-5p的表达水平；B：hsa-miR-11400的表达水平；C：hsa-miR-148a-5p的表达水平；D：hsa-miR-199a-5p的表达水平；E：hsa-miR-23b-3p的表达水平；