[发明专利]一种高纯度杜仲叶总黄酮的制备方法及在抗骨质疏松方面的应用

说明书

本发明公开了一种高纯度杜仲叶总黄酮的制备方法及在抗骨质疏松方面的应用，涉及生物医药领域。该制备方法包括先将杜仲叶粉碎后加入质量分数为55％‑65％的乙醇溶液中，浸泡0.5‑5h，闪式提取2次，过滤后将滤液减压浓缩和冷冻干燥后，经NKA‑9型大孔树脂富集和聚酰胺树脂纯化，得到杜仲叶总黄酮。本发明所提供的杜仲叶总黄酮可以有效提高峰值骨量大鼠的骨密度、骨体积分数、骨小梁数量和骨形成指标血清骨钙素水平，可降低骨小梁分离度和骨吸收指标血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b活性，还可提高大鼠的骨形成和抑制骨吸收，进而影响骨代谢，表明杜仲叶总黄酮的抗骨质疏松效果显著，可作为一种潜在的抗骨质疏松药物。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种高纯度杜仲叶总黄酮的制备方法及在抗骨质疏松方面的应用。

背景技术

杜仲叶为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥树叶，《中国药典》2020年版一部记载：杜仲叶具有补肝肾、强筋骨的功效，用于肝肾不足、头晕目眩、腰膝酸痛、筋骨痿软。骨质疏松症是一种骨骼系统全身性、退化性的病变，是以患者的骨微结构遭到破坏、骨量减少从而导致骨强度下降、骨脆性增加及骨折危险性增大为特征的代谢性疾病。骨质疏松是一种常见的骨骼疾病，随着年龄的增长，骨丢失程度增加，骨质疏松症的程度和患病率也随之加重。临床上常用于治疗骨质疏松的药物有骨吸收抑制剂，如降钙素、双膦酸盐；骨形成促进剂，如甲状旁腺素制剂、氟化物；骨矿化药物，如维生素D、钙剂等，但以上的药物均需要长期服用。

目前有关杜仲叶活性成分的报道主要集中于木脂素类、环烯醚萜类、类苯丙素、黄酮类化合物等及抗氧化、抗炎杀菌、降压、降脂降糖、免疫调节、抗癌、抗衰老等药理作用。黄酮类化合物是杜仲叶的主要活性成分之一，目前从杜仲叶中分离出的黄酮类化合物有十几种，主要有山奈酚、槲皮素苷、槲皮素、紫云英苷、芦丁、异槲皮苷、陆地锦苷等。而关于杜仲叶总黄酮抗骨质疏松的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度杜仲叶总黄酮的制备方法及在抗骨质疏松方面的应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明所制备得到的杜仲叶总黄酮，体内试验结果表明其抗骨质疏松作用显著。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

技术方案一：杜仲叶总黄酮在制备治疗去卵巢骨质疏松的药物中的应用。

技术方案二：杜仲叶总黄酮在制备促进儿童身高、上肢和下肢伸长的药物中的应用。

进一步地，所述杜仲叶总黄酮中黄酮类化合物质量百分含量不低于95％。

技术方案三：一种杜仲叶总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)杜仲叶粉碎后加入质量分数为55％-65％的乙醇溶液中，浸泡0.5-5h，闪式提取2次，过滤后将滤液减压浓缩，冷冻干燥后得到杜仲提取物；

(2)将所述杜仲提取物经NKA-9型大孔树脂富集，得到杜仲总黄酮粗提物；

(3)将所述杜仲总黄酮粗提物利用聚酰胺树脂纯化，得到所述杜仲叶总黄酮。

进一步地，在步骤(1)中，所述乙醇溶液的加入量，按照料液比计为1：20g/mL。

进一步地，在步骤(1)中，所述闪式提取2次，包括先闪式提取3-10min，静置30min，再次闪式提取3-10min。

进一步地，在步骤(2)中，所述经NKA-9型大孔树脂富集得到杜仲叶总黄酮粗提物包括：将所述杜仲叶提取物制成含总黄酮浓度为0.8mg/mL的粗提液，调节pH值为2，得上柱液1，采用NKA-9型大孔吸附树脂进行吸附，水洗至无色，用质量分数为60％的乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到所述杜仲叶总黄酮粗提物。