[发明专利]一种由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒

权利要求书

1.一种由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，包括：检测由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的各个基因位点的野生型序列的特异性寡核苷酸、突变型序列的特异性寡核苷酸和分别识别各个基因位点的通用寡核苷酸；

其中，SCN5A突变基因的突变位点分别为：c.2893CT（p. R965C）和 c.2431CT（p.R811C）；

c.2893CT（p.R965C）突变位点的野生型序列的特异性寡核苷酸为：5’-TAGTTAAGCCGGCCCCTCTGGATGCG-3’；c.2893CT（p.R965C）突变位点的突变型序列的特异性寡核苷酸为：5’-GTACAATCTGCGGCCCCTCTGGATGCA-3’；c.2893CT（p.R965C）位点的通用寡核苷酸为：p-5’- GGCCAGGGCCAGCTGGAGGT-botin-3’；

c.2431CT（p.R811C）突变位点的野生型序列的特异性寡核苷酸为：5’-ACCTATACCCGGTACCAGGCG-3’；c.2431CT（p.R811C）突变位点的突变型序列的特异性寡核苷酸为：5’-GGATAACAAGGTACCAGGCA-3’；c.2431CT（p.R811C）位点的通用寡核苷酸为：p-5’-GAAGGAGCGCAGCACCGACA-botin-3’。

2.根据权利要求1所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括包被有捕获序列的微孔板，其中，c.2893CT（p.R965C）突变位点的野生型序列的捕获序列为：5’-GGCTTAACTATGCGG-3’，c.2893CT（p.R965C）突变位点的突变型序列的捕获序列为：5’-GCAGATTGTACTGAG-3’；c.2431CT（p.R811C）突变位点的野生型序列的捕获序列为：5’-GGGTATAGGTAGTCGTATTA-3’，c.2431CT（p.R811C）突变位点的突变型序列的捕获序列为：5’-GGATAACAAGGTACCAGGCA-3’。

3.根据权利要求2所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Taq DNA连接酶、10X Taq DNA 连接酶反应缓冲液、AULF-TAG标记物、封闭液、洗涤液和读取液。

4.根据权利要求3所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述Taq DNA连接酶为40U/μL；

10X Taq DNA 连接酶反应缓冲液包括200 mM Tris-HCl、250 mM KAc、100 mM MgAc2、10 mM NAD⁺、100 mM DTT及1% Triton X-100，pH 7.0-8.0；

AULF-TAG标记物为500μg/mL；

封闭液为含0.5% BSA的PBS液，10mM，pH=7.2-7.4；

洗涤液为含0.05% 吐温20的tris缓冲液，5-10mM，pH=7.2-7.4；

读取液为1 X Read Buffer。

5.根据权利要求3或4所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在进行杂交扩增的反应程序包括：在94-95℃条件下反应2min；然后，在94-95℃条件下反应30s；最后，在60℃条件下反应2min；共30-35个循环。

6.根据权利要求1所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自外周血。

7.根据权利要求6所述的由SCN5A突变基因导致儿童型病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，

以试剂盒中杂交反应体系为50μL计，Taq DNA连接酶为2μL，10X Taq DNA 连接酶反应缓冲液为5μL，寡核苷酸混合液5μL，外周血DNA 100ng-1μg。

8.根据权利要求1或7所述的由SCN5A突变基因导致病态窦房结综合征的双点突变基因型检测试剂盒，其特征在于，所述野生型序列的特异性寡核苷酸、突变型序列的特异性寡核苷酸和通用寡核苷酸的终浓度均为0.1-0.5μM。