[发明专利]抗I型胶原氨基末端肽的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗I型胶原氨基末端肽(NTX)的单克隆抗体或其抗原结合片段。所述单克隆抗体中，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链CDR2的氨基酸序列为LMS，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。上述抗I型胶原氨基末端肽的单克隆抗体或其抗原结合片段具备抗I型胶原氨基末端肽的高亲和力和高特异性，能够用于制备灵敏、特异的I型胶原氨基末端肽检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种抗I型胶原氨基末端肽(NTX)的单克隆抗体及其应用。

背景技术

骨质疏松症是以骨量减少、骨显微结构损害、骨脆性增加和骨折风险增高为特征的全身性骨骼疾病。骨质疏松一般多见于老年人，尤其是绝经后的妇女，但各个年龄段均可能发病。根据流行病学调查结果，我国有2亿以上的人群存在低骨量问题，女性骨质疏松症患病率达20.7％，男性为14.4％，因骨质疏松导致的骨折呈逐年攀升趋势，严重影响患者的生活质量，并且给社会造成沉重的医疗负担，成为广泛关注的公众健康问题。骨质疏松的发生是一个缓慢、渐进的过程。骨质疏松症患者在早期常无明显症状，后期可出现全身疼痛、脊柱变形、骨折等一系列的症状，其严重后果是发生骨质疏松性骨折，即脆性骨折，致残率和致死率高。更早发现骨代谢的异常，诊断骨质疏松症，有利于及时采取适当的干预措施预防骨质疏松症发生发展，提高患者生活质量，减轻个人、社会经济负担。

人体骨骼系统终身持续进行骨代谢过程，即成骨细胞形成新骨和破骨细胞吸收旧骨的过程，二者保持着动态平衡，也称为骨转换(骨吸收和骨形成)的动态平衡。当此平衡受到破坏，骨吸收增多，或者骨形成减少，使骨吸收超过骨形成，则会导致骨质疏松。成骨细胞和破骨细胞合成与分解的产物构成了骨转换标志物(bone turnover markers，BTMs)，对这些标志物的检测可及时反映骨平衡状态。虽然骨密度检测目前常用于诊断骨质疏松症，但其对于骨质疏松症早期诊断、骨折风险预测的敏感性仍不尽人意，对于骨质疏松症治疗疗效判断又欠缺即时性，存在一定的限制。骨密度用于检测药物疗效其治疗前后变化有明显统计学差异至少需要6个月以上，通常为1-2年，因此不适合短期的随访监测。而骨转换标志物一方面其水平变化显著早于骨密度的改变，能够更早期发现骨代谢异常，有助于骨质疏松症的早期诊断；另一方面，在开始抗骨质疏松治疗后3-6个月后即可检测出骨吸收标志物水平降低30-70％，治疗后6-12个月可检测到骨形成标志物升高30-50％，比骨密度更加敏感，早在骨密度变化之前即可进行早期疗效判断，及时调整治疗方案，避免延长无效治疗时间。

I型胶原作为骨骼中唯一的胶原物质，占骨骼基质的90％。胶原从合成到成熟经历不同的阶段：氨基酸—前胶原—原胶原—胶原。成骨细胞中含有大量I型前胶原，骨形成时I型前胶原被分泌到细胞外，裂解为I型前胶原羧基末端前肽(PICP)、I型前胶原氨基末端前肽(PINP)和I型胶原三个片段。骨吸收时，破骨细胞参与骨吸收过程中产生I型胶原降解产物，释放进入血液并从尿液排出。其中特异性降解产物I型胶原氨基末端肽(NTX)和I型胶原羧基末端肽(CTX)是由I型胶原降解产生的部分紧密交联的氨基末端和羧基末端肽段结构域，能直观的反映出骨吸收的状态，是很好的骨吸收标志物。NTX在血清中和尿液中均可检出，但血清中的水平受昼夜生理节律、饮食的影响较大，而24小时尿中的NTX可以克服生理节律的影响，受饮食影响也比较小。尿液中的NTX是骨吸收的特异和敏感指标，可用于预测骨吸收趋势及疗效监测。但是，目前国内没有一款获得国家药品监督管理局批准的NTX检测产品，其重要原因就在于缺乏高亲和力高特异性的抗NTX抗体。

本发明将针对I型胶原氨基末端肽(NTX)，制备高亲和力高特异性的抗I型胶原NTX抗体，为发展灵敏、特异、准确的I型胶原NTX检测试剂盒奠定基础。

发明内容