[发明专利]黑曲霉突变株ANPEP15M1及其应用

说明书

本发明涉及基因工程菌领域，具体涉及黑曲霉突变株ANPEP15M1及其应用。所述突变菌株ANPEP15M1的保藏号为GDMCCNO：63131。本发明的黑曲霉突变株能显著提高酸性蛋白酶的产量，发酵过程中生物量显著增加，利用发酵培养基对重组工程菌进行7L发酵罐发酵培养99h后，其中重组菌株的酸性蛋白酶总酶活达到26255U/mL，发酵效率明显优于同等条件下的现有生产菌株，适用于酸性蛋白酶的工业生产，且有效提高的生产效率，市场前景广阔。

技术领域

本发明涉及基因工程菌领域，具体涉及黑曲霉突变株ANPEP15M1及其应用。

背景技术

酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的最适pH，并水解蛋白质的水解酶类。目前商品酸性蛋白酶的生产菌，主要是黑曲霉、黑曲霉大孢子变种、斋藤曲霉、根霉、杜邦青霉、血红色陀螺孔菌和微小毛霉等菌株。

曲霉酸性蛋白酶(EC 3.4.23.18，EC 3.4.23.19)是一类适合在酸性环境中(pH2.0-5.0)分解蛋白质的酶类，包括曲霉蛋白酶I(Aspergillopepsin I)和曲霉蛋白酶II(Aspergillopepsin II)两大类。由于曲霉酸性蛋白酶能够提高单胃动物特别是幼龄动物对饲料蛋白成分的消化吸收率，促进其生长发育。酸性蛋白酶分解蛋白质的条件与动物体内消化系统的环境相似，故可通过提高动物对蛋白质的水解效率来提高对蛋白质的消化吸收率，以取得良好的喂养效果。同时，随着生物技术推广与合成生物学的研究深入，酸性蛋白酶通过工业发酵的方法获得已成现实，因此，酸性蛋白酶适合作为饲料添加剂的天然酶制剂。从另一方面看，酸性蛋白酶作为饲料添加剂加入到动物日粮中，可显著提高饲料转化率，从而减少饲料的浪费以及降低对环境的污染(氮的排放)，缓解我国蛋白质饲料资源缺乏的状况。

目前酸性蛋白酶生产菌株的产酶量仍不是很高，导致该酶的生产成本居高不下，也在一定程度上限制了酸性蛋白酶的广泛应用。挖掘产量更高，酶活更高的生产菌株或生产方法是急需的，此外，也有助于酸性蛋白酶更广泛地应用于酿造工业、制革工业、临床医学及食品工业等领域。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高产酸性蛋白酶的黑曲霉突变菌株。

本发明的另一目的是提供上述黑曲霉突变菌株的应用。

本发明的再一目的是提供包括上述黑曲霉突变菌株，或由上述黑曲霉突变菌株生产的酸性蛋白酶的制剂。

本发明的再一目的是提供制备酸性蛋白酶的方法。

根据本申请的黑曲霉菌株是重组表达酸性蛋白酶的菌株通过紫外诱变的方法筛选出的突变株，能显著提高酸性蛋白酶的产量，为低成本、规模化生产酸性蛋白酶奠定了基础。

根据本发明的高产酸性蛋白酶的黑曲霉(Aspergillus niger)突变菌株ANPEP15M1，于2023年1月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，(地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070)，保藏号为GDMCC NO：63131。

本发明提供了包含上述高产酸性蛋白酶的黑曲霉菌株的微生物制剂。

本发明提供上述高产酸性蛋白酶的黑曲霉菌株在酸性蛋白酶生产中的应用。

根据本发明的制备酸性蛋白酶的方法，所述方法包括发酵所述高产酸性蛋白酶的黑曲霉(Aspergillus niger)突变菌株ANPEP15M1的步骤。

根据本发明的制备酸性蛋白酶的方法，在30℃发酵，发酵过程中pH降至5.0时开始通氨通过流加氨水控制pH为4.8～5.2，通风量8L/min，转速：500～1000rpm，补料DE值控制在10；36小时至放罐补料DE值控制在20，然后逐渐加大转速，培养99h。

本发明的有益效果是：