[发明专利]一种含有MDR1-siRNA和阿霉素的载药系统

说明书

本发明公开了共载阿霉素和MDR1‑siRNA的靶向递送载体Cex‑HSA/DOX/siMDR1，公开了其制备方法和最优处方，公开了其形态、结构等理化性质，公开了其在药量、包封率、释药行为，公开了其细胞摄取效率、基因沉默效率，公开了其逆转肿瘤细胞耐药性和发挥肿瘤涉及共载阿霉素和MDR1‑siRNA的靶向递送载体Cex‑HSA/DOX/siMDR1细胞增殖抑制作用的机制，进一步公开了其靶向性抑制BALB/c荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用和体内安全性。进而阐明了该靶向递送载体在肿瘤的基因治疗领域具有重要的应用。

技术领域

本发明涉及一种含有MDR1-siRNA和阿霉素(DOX)的载药系统Cex-HSA/DOX/siMDR1，属于生物医药学领域。

背景技术

肿瘤多药耐药(MDR)现象普遍存在于各类肿瘤细胞中，是指肿瘤细胞在长期接触一种化疗药物后，对该种药物产生耐药性，而且对其他机制和结构不同的其他化疗药物也产生耐药性，在临床中是造成肿瘤化疗失败的重要原因。逆转肿瘤多药耐药的途径有很多，目前已有研究证明采用RNA干扰(RNAi)技术以沉默MDR1基因的表达、降低P-gp的表达水平，可以使药物外排量下降，逆转肿瘤的多药耐药，增强肿瘤细胞对与化疗药物的敏感性，以提高化疗药的功效。RNAi技术是由siRNA引发的特异性基因沉默效应，因其具有基因靶向性强、候选靶标丰富等特性，在肿瘤的治疗领域引起了广泛的关注；但是siRNA分子量大、稳定性差、半衰期短以及难以被细胞摄取大大限制了其应用，为siRNA寻找合适有效的载体至关重要。

人源性血清白蛋白(Human serum albumin，HSA)在中性条件下带负电荷，等电点为4.7-4.8，并且局部具有正电性，可将siRNA包封在其中形成1-1000nm的纳米粒。此外，HSA安全无毒，无免疫原性，具有可生物降解、生物相容性好的特点，使其成为优异的药物递送载体。为了提高肿瘤部位的药物蓄积，增强纳米粒的靶向性，减少正常组织的药物毒副作用，本发明将西妥昔单抗修饰于包载MDR1-siRNA和阿霉素的HSA纳米粒上，构成由抗体介导的siRNA和阿霉素靶向共转运递送体系Cex-HSA/DOX/siMDR1(C-H/D/M)，并对该纳米递送系统的理化性质、基因递送效率、体内外逆转肿瘤耐药的效果和生物安全性等进行了系统评价，为耐药肿瘤的治疗提供了新的思路和方法。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种共载阿霉素(DOX)和MDR1-siRNA的载药系统，Cex-HSA/DOX/siMDR1。

本发明所述的载药系统，由抗肿瘤基因治疗药物阿霉素、逆转肿瘤多药耐药的MDR1-siRNA、靶向分子西妥昔单抗(Cex)和人血清白蛋白(HSA)制备而成。。

本发明所述的载药系统Cex-HSA/DOX/siMDR1，为纳米结构。

本发明的另一个目的在于提供载药系统Cex-HSA/DOX/siMDR1的制备方法。

本发明所述的制备方法，包括以下步骤：

去溶剂法制备共载DOX和siMDR1的白蛋白纳米粒，在巯基化的白蛋白纳米粒表面修饰Cex。

本发明所述的载药系统的制备方法，包括以下步骤：

1)制备共载阿霉素和MDR1-siRNA的白蛋白纳米粒HSA/DOX/siMDR1，方法如下：将HSA、盐酸阿霉素、MDR1-siRNA溶于NaCl溶液中，缓慢滴加无水乙醇，得到白蛋白纳米粒，用戊二醛固定；

2)制备西妥昔单抗修饰的白蛋白纳米粒Cex-HSA/DOX/siMDR1，方法如下：用NHS-PEG3500-MAL对制备好的纳米粒进行巯基化，用2-亚氨基硫烷盐酸盐对西妥昔单抗进行硫醇化，将巯基化的纳米粒与硫醇化的西妥昔单抗常温混合搅拌，得到Cex-HSA/DOX/siMDR1。

优选的，本发明所述的载药系统Cex-HSA/DOX/siMDR1制备方法，包括以下步骤：