[发明专利]一种检测柑橘黄龙病菌的方法

权利要求书

1.一种检测柑橘黄龙病菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：以氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的蛋白作为抗原，获得相应抗体，提取待测样本的蛋白，将待测样本的蛋白结合至固相载体上，利用所述抗体对固相载体上的蛋白进行检测，若是出现25kDa条带，则表明为柑橘黄龙病菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，编码权利要求1所述蛋白的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的基因插入质粒载体中，获得重组质粒，将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞后进行小量诱导表达和/或大量诱导表达，纯化浓缩后得所述抗原。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述质粒载体包括pET-28a(+)。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，获得相应抗体的步骤包括：将免疫佐剂和所述抗原溶液液等体积混和后，对体重2.4-2.6Kg的新西兰白兔进行免疫，第一次免疫抗原浓度为1mg/ml，每只兔子注射0.5ml，第二次免疫至第四次免疫抗原浓度为0.5mg/ml，每只兔子注射0.5ml。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，第一次免疫采用完全佐剂，第二次免疫至第四次免疫采用不完全佐剂。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体为单克隆或多克隆抗体，所述固相载体包括PVDF膜。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将待测样本的蛋白结合至固相载体上时，所用的二抗为羊抗兔二抗。

9.氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白或核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的基因在检测植物柑橘黄龙病菌中的应用。

10.氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白或核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的基因在检测植物柑橘黄龙病菌HflC蛋白积累量中的应用。